核桃(Juglans regia L.)具有無融合生殖能力,利用無融合胚建立核桃的離體再生體系,這在栽培和育種上均具有很重要的理論和實踐意義。本論文觀察了不同核桃品種(系)的無融合生殖率,研究了適宜的外植體滅菌方法和控制褐化的方法,篩選了誘導核桃胚萌發(fā)以及核桃莖段培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。主要結果如下:1.不同核桃品種(系)的無融合生殖能力調(diào)查。采用套袋隔離,觀察了5個供試核桃品種(系)的無融合生殖能力。結果表明,供試材料均具有無融合生殖能力,平均無融合生殖率為52.47%。其中,‘香玲’的無融合生殖率為54.67%,‘元林’為52.33%,‘瑞嘉’為56.67%,‘瑞秀’為49.67%,‘Y17’為49.00%,方差分析顯示各品種間無融合生殖能力差異顯著。2.核桃離體胚萌發(fā)成苗的最佳培養(yǎng)基組合是DKW+6-BA 2.0mg·L~(-1)+PVP200mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+瓊脂7g·L~(-1)。最佳滅菌條件及培養(yǎng)基的選擇。外植體材料為5個供試品種的無融合生殖胚,核桃胚在70%酒精消毒30s,0.1%升汞表面消毒5min的情況下滅菌效果最好,污染率僅為1.11%。核桃胚在MS、DKW、1/2MS、WPM等4個基本培養(yǎng)基中的萌發(fā)率差異顯著,在DKW中的萌發(fā)率最高為73.50%。培養(yǎng)基中添加蔗糖濃度為30g·L~(-1)時,核桃胚萌發(fā)率最高為72.39%,不同濃度蔗糖的基本培養(yǎng)基誘導核桃胚萌發(fā)的差異顯著。培養(yǎng)基的pH值在5.8時,核桃胚的萌發(fā)率最高為73.04%,不同pH值的基本培養(yǎng)基誘導核桃胚萌發(fā)的差異顯著。最佳取材時間的確定及不同品種(系)的萌發(fā)成苗率。取材時間在7月15號左右的核桃種胚萌發(fā)成苗率很高,為78.10%,核桃幼胚的萌發(fā)成苗率比成熟的核桃胚萌發(fā)成苗率高,不同的取材時間萌發(fā)成苗率差異顯著。核桃的5個品種中,‘Y17’的萌發(fā)成苗率最高為79.29%,5個品種之間的萌發(fā)成苗率差異顯著。培養(yǎng)條件的優(yōu)化包括溫度、濕度、光照強度的篩選。當培養(yǎng)箱溫度為26℃,核桃胚萌發(fā)成苗率最高為71.35%,相對濕度為40%,核桃胚的萌發(fā)率最高為71.37%,光強3000lx時,核桃胚的萌發(fā)率最高為71.33%,且不同的溫度條件之間,濕度條件之間、光照強度之間的差異性顯著。PVP的濃度為200mg·L~(-1),核桃胚的褐化率為2.26%,不同濃度的PVP對核桃胚褐化率影響差異性顯著。且轉接時間隔4天時可以降低核桃胚的褐化率。植物生長調(diào)節(jié)劑的篩選。在核桃胚離體萌發(fā)的培養(yǎng)中,不同的植物生長調(diào)節(jié)劑對核桃胚的萌發(fā)成苗影響表現(xiàn)為當6-BA的濃度為2.0mg·L~(-1)時,核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為73.58%。當KT的濃度為1.0mg·L~(-1)時,核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為70.46%。當2,4-D濃度為2.0mg·L~(-1)時,核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為60.68%。不同濃度的6-BA、KT、2,4-D之間影響核桃胚萌發(fā)成苗差異顯著,以6-BA的誘導效果最好。Picloram可以誘導核桃胚產(chǎn)生不定芽,且當Picloram的濃度為0.01mg·L~(-1)時,產(chǎn)生的不定芽數(shù)最多,不定芽長勢最好,不同濃度的Picloram對核桃胚不定芽的誘導差異性顯著。不同濃度的IBA對核桃胚萌發(fā)成苗影響差異不顯著,且誘導率極低。3.核桃莖段不定芽萌發(fā)分化的最佳培養(yǎng)基組合是DKW+6-BA1.5mg·L~(-1)+IBA0.01mg·L~(-1)+PVP 300mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+瓊脂7g·L~(-1)。在核桃的莖段培養(yǎng)中,植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA1.5mg·L~(-1)和IBA0.01mg·L~(-1)的組合,KT1.0mg·L~(-1)和IBA0.01mg·L~(-1)的組合,核桃莖段的增殖芽數(shù)多,長勢好,且前者強于后者,后者誘導莖段長出許多無效的愈傷組織。PVP的濃度為300mg·L~(-1)時可以將核桃莖段的褐化率降低到9.79%。核桃莖段的品種不同,誘導增殖芽數(shù)也不同,5個品種中,‘Y17’增殖倍數(shù)最大為3.63。
【學位單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：S664.1
【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 核桃無融合生殖的研究
    1.2 核桃組織培養(yǎng)的研究
        1.2.1 用于核桃組織培養(yǎng)的外植體選擇
        1.2.2 用于核桃組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基選擇
        1.2.3 用于核桃組織培養(yǎng)的植物生長調(diào)節(jié)劑選擇
        1.2.4 消毒滅菌方式的選擇
        1.2.5 影響核桃組織培養(yǎng)的其他因素
    1.3 本研究的目的和意義
    1.4 研究的技術路線
2 材料與方法
    2.1 試驗地點概況
    2.2 試驗材料
        2.2.1 核桃的無融合生殖研究材料
        2.2.2 核桃的胚培養(yǎng)研究材料
        2.2.3 核桃莖段培養(yǎng)研究材料
    2.3 試驗方法
        2.3.1 核桃無融合生殖能力的調(diào)查
        2.3.2 不同消毒方式對核桃種胚污染的影響
        2.3.3 核桃胚培養(yǎng)基本培養(yǎng)基的確定
        2.3.4 培養(yǎng)基pH值對核桃胚萌發(fā)的影響
        2.3.5 不同的蔗糖濃度對核桃胚萌發(fā)的影響
        2.3.6 培養(yǎng)條件對核桃胚萌發(fā)的影響
        2.3.7 不同植物生長調(diào)節(jié)劑誘導核桃胚萌發(fā)成苗的影響
        2.3.8 核桃胚萌發(fā)褐化問題的研究
        2.3.9 不同取材時間對核桃胚萌發(fā)成苗的影響
        2.3.10 不同品種的核桃胚萌發(fā)成苗的比較
        2.3.11 PVP對核桃莖段培養(yǎng)褐化問題的研究
        2.3.12 不同植物生長調(diào)節(jié)劑配比對核桃莖段培養(yǎng)的影響
        2.3.13 不同品種的核桃莖段培養(yǎng)的比較
    2.4 數(shù)據(jù)處理
3 結果與分析
    3.1 不同品種核桃的無融合生殖能力
    3.2 最佳消毒方式的確定
    3.3 最佳基本培養(yǎng)基的確定
    3.4 培養(yǎng)基最佳pH值的確定
    3.5 最佳蔗糖濃度的確定
    3.6 最佳培養(yǎng)條件的確定
        3.6.1 最適宜溫度條件的確定
        3.6.2 最佳濕度條件的確定
        3.6.3 最佳光照強度的確定
    3.7 植物生長調(diào)節(jié)劑最佳濃度的確定
        3.7.1 最佳 6-BA濃度的確定
        3.7.2 最佳KT濃度的確定
        3.7.3 最佳 2,4-D濃度的確定
        3.7.4 最佳picloram濃度的確定
        3.7.5 最佳IBA濃度的確定
    3.8 核桃胚培養(yǎng)過程中褐化的控制
        3.8.1 不同轉接時間對核桃胚萌發(fā)褐化率的影響
        3.8.2 PVP對核桃胚萌發(fā)褐化率的影響分析
    3.9 不同取材時間對核桃胚萌發(fā)成苗的影響
    3.10 不同品種的核桃胚萌發(fā)成苗率的比較
    3.11 PVP對核桃莖段培養(yǎng)褐化問題的研究分析
    3.12 不同植物生長調(diào)節(jié)劑配比對核桃莖段培養(yǎng)的影響
        3.12.1 不同濃度的 6-BA和IBA對核桃莖段不定芽分化的影響
        3.12.2 不同濃度的KT和IBA對核桃莖段不定芽分化的影響
    3.13 不同品種的核桃莖段培養(yǎng)的比較
4 討論
    4.1 關于核桃的無融合生殖
    4.2 關于核桃胚培養(yǎng)
        4.2.1 滅菌方式、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的的選擇
        4.2.2 植物生長調(diào)節(jié)劑的選擇
        4.2.3 褐化的防治
        4.2.4 不同取材時間及不同品種（系）的萌發(fā)成苗比較
    4.3 關于核桃莖段培養(yǎng)
    4.4 關于從核桃胚誘導體細胞胚的問題
5 結論
參考文獻
附錄（圖版）
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2837344