發(fā)布時間：2020-10-10 23:46

　　 桃屬于薔薇科李屬,是我國重要經濟作物之一。由于傳統(tǒng)雜交育種已無法滿足我國桃產業(yè)的快速發(fā)展,因此開發(fā)出更為高效的育種手段勢在必行。隨著現代生物技術的快速發(fā)展,基于轉基因技術的遺傳改良手段在果樹育種中得到了越來越多的運用。然而,由于桃缺少高效穩(wěn)定的再生和遺傳轉化體系,使得利用基因工程方式進行桃種質改良困難重重�；诖�,本研究以‘秋蜜紅’、‘黃水蜜’和‘大久�！N不同基因型桃的花藥和花瓣為試驗材料建立無菌體系,篩選出最佳誘導愈傷組織培養(yǎng)基,以期建立三種基因型桃的高效再生體系;此外,由于李與桃同屬于李屬植物,且李遺傳轉化體系較為成熟,本研究以‘脆紅李’和‘黑寶石’李的下胚軸切片和子葉為外植體,探討了不同菌株、不同菌液濃度對GUS瞬時表達率和GUS染色效果的影響,以期建立李遺傳轉化體系,為后續(xù)進行桃功能基因驗證和通過遺傳轉化方法創(chuàng)新種質資源奠定基礎。主要研究結果如下:1.桃花藥培養(yǎng)及愈傷組織的誘導(1)花藥愈傷誘導的最佳時期為小花蕾期,花藥的單核期,此時的花藥顏色為黃紅色。(2)花器官最佳的消毒方式為:75%酒精+0.1%NaClO消毒5 min。(3)適合花藥愈傷組織誘導的處理1培養(yǎng)基為:NN69培養(yǎng)基+Suc 60 g·L~(-1)+植物凝膠3.0 g·L~(-1)+6-BA2.0 mg·L~(-1)+2,4-D 1.0 mg·L~(-1)。適合花瓣愈傷組織誘導的處理2培養(yǎng)基為:NN69培養(yǎng)基+Suc 60 g·L~(-1)+植物凝膠3.0 g·L~(-1)+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.5 mg·L~(-1)。對不同品種間愈傷組織誘導率進行對比,結果表明:‘秋蜜紅’的愈傷組織形成率比較高,其花藥在處理1的條件下愈傷組織形成率高達22.08%,花瓣的愈傷組織形成率在處理2的條件下則高達100%。(4)根據形態(tài)學和組織學鑒定3種愈傷組織狀態(tài),黃色緊實狀和綠色緊實狀的為胚性愈傷組織,淺黃色松散狀為嵌合體。2.李遺傳轉化體系初探(1)‘脆紅’李的遺傳轉化‘脆紅’李下胚軸切片為外植體進行遺傳轉化時,當菌株為EHA105,菌液濃度(OD_(600))為0.5時,‘脆紅’李下胚軸的GUS瞬時表達率為73.33%;‘脆紅李’子葉的GUS瞬時表達率高達100%,其中,片狀、深藍色的狀態(tài)為62.5%。(2)不同培養(yǎng)基對‘脆紅’李下胚軸切片褐化的影響比較了添加PVP與提高TDZ和IBA的濃度及配比,對‘脆紅’李下胚軸切片在遺傳轉化過程中抗褐化的效果,結果表明適合下胚軸分化的培養(yǎng)基為:3/4MS培養(yǎng)基+IBA 0.05 mg·L~(-1)+TDZ 3.0mg·L~(-1)+Tim 300 mg·L~(-1)+Kan 80 mg·L~(-1)+PVP 1.0 g·L~(-1)。(3)‘黑寶石’李下胚軸切片的遺傳轉化‘黑寶石’李下胚軸切片為外植體進行遺傳轉化時,當菌株為GV3101,菌液濃度(OD_(600))為0.5時,‘黑寶石’李下胚軸切片的GUS瞬時表達率為60%;‘黑寶石’李子葉的GUS瞬時表達率高達100%,其中,片狀、深藍色的狀態(tài)為79.24%。
【學位單位】：河南農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S662.1
【部分圖文】：

圖 2-1 單核期的花蕾外部形態(tài)及細胞學觀察he external morphology and cytological observation of buds 蕾的開放狀態(tài)，圖標比例尺 1 cm；B：花粉的發(fā)育時期在uds at the time of sampling, bar = 1 cm; B: The period of polperiod, bar = 5 um處理對外植體的影響

圖 2-3 花瓣在不同培養(yǎng)基上的生長狀態(tài)Fig,2-3. Growth of petals on different mediumA：花瓣接種時的狀態(tài)；B：NN69 培養(yǎng)基上長出的黃色緊實愈傷組織；C：MS 培養(yǎng)基上生長的黃白色，水漬愈傷A:The state of petal inoculation;B: Yellow compact callus grown on NN69 medium; C: Yellow and water-stained callus

圖 2-2 花藥愈傷組織各階段的生長狀態(tài)Fig, 2-2. Growth of anther callus at various stages藥接種時的狀態(tài)；B：花藥接種 15 d 時，花藥隔開裂，長出愈傷，圖標比例尺 200 um；C：花藥接種 8 w 花藥長出顆粒狀愈傷；D：花藥愈傷褐化狀態(tài)；F：花藥愈傷水漬狀態(tài)，圖標比例尺 1 mm
【參考文獻】

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本文編號：2835717