采用簡單重復序列間區(qū)(ISSR)標記技術和簡單序列重復(SSR)標記技術,對采自青海、西藏、四川和云南4個省的野生全緣葉綠絨蒿16個居群共185個個體的遺傳多樣性、遺傳結構和遺傳距離進行了檢測分析,以期為全緣葉綠絨蒿種質(zhì)資源的保護和有序開發(fā)利用提供參考。本研究利用Popgen1.32計算遺傳相似系數(shù)(GS)、Shannon指數(shù)、Nei’s指數(shù);AMOVA進行遺傳變異分析;利用MEGA4.0軟件和MVSP軟件,采用UPGMA法分別對16個居群和185個體進行聚類分析并構建樹狀圖,并用MVSP中的主成分分析(PCA)對群體的遺傳關系進行聚類分析,最后用TFPGA軟件對居群間的遺傳距離和地理距離進行Mental相關性檢測。得出的主要結論如下:(1)ISSR的21條引物共擴增出279個條帶,平均每條引物擴增出13.3個條帶,其中多態(tài)性條帶278個,條帶在150~2000bp之間均有分布,物種水平上的遺傳多樣性百分比PPB=99.64%,種群水平上的遺傳多樣性百分比PPB比較結果為:JZWSDDSCDSJLS(=BMXS)YS(=CS=BLS)NMCBYQYLXSHYDRMDKQJYSBM。(2)ISSR的遺傳多樣性結果顯示:全緣葉綠絨蒿不同居群的Nei’s基因多樣性指數(shù)(He)范圍在0.0520~0.2083之間,Shannon’s多樣性信息指數(shù)(I)在0.0795~0.3134范圍內(nèi);有效等位基因數(shù)(Ne)的平均值為1.6769,觀測等位基因數(shù)(Na)平均值為1.9964,二者的比值為84.00%,說明全緣葉綠絨蒿ISSR標記有很高的遺傳多樣性。比較遺傳參數(shù)后發(fā)現(xiàn),居群BLS的遺傳多樣性最高,居群BM的遺傳多樣性最低。遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.6197,表明遺傳變異主要存在于種群間,為61.97%。分子變異(AMOVA)分析結果也同樣顯示,全緣葉綠絨蒿的主要遺傳變異存在于種群間(占59.949%)。(3)在用ISSR計算得到的遺傳距離對全緣葉綠絨蒿不同居群進行UPGMA聚類時,居群(BM)首先分離為一枝,與其他居群聚為第Ⅳ類;居群(DDS)與居群(CD)聚為一枝,與四川理塘剪子彎山居群(JZWS)聚為第Ⅱ類;居群(YS)與居群(CS)聚為一枝,與居群(SJLS)聚為第Ⅲ類;居群(NMC)與居群(MDK)為一枝,居群(BLS)與居群(DR)聚為一枝,與居群(BYQ)、居群(HY)、居群(BMXS)、居群(QJYS)、居群(YLXS)聚為第I類。(4)SSR的23對引物共檢測到84個條帶,平均每對引物擴增出3.7個條帶,其中多態(tài)性條帶77個,條帶主要分布在100~220bp之間,物種水平上遺傳多樣性百分比PPB=91.67%,種群水平上的遺傳多樣性百分比PPB比較結果為:BLSBMXSMDKDRJZWSBYQSJLSHYDDS(=CD)QJYSYSNMCYLXSCSBM。(5)SSR的遺傳多樣性結果顯示:16個居群的Nei’s基因多樣性指數(shù)(He)范圍為0.0226~0.1603,Shannon’s多樣性信息指數(shù)(I)的范圍為0.0334~0.2436;有效等位基因數(shù)(Ne)的平均值為1.5037,觀測等位基因數(shù)(Na)平均值為1.9167,二者之比為78.45%,說明SSR作為分析全緣葉綠絨蒿遺傳多樣性的分子標記是可行的。比較遺傳參數(shù)后發(fā)現(xiàn),居群JZWS的遺傳多樣性最高,居群BM的遺傳多樣性最低。遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.6902,表明遺傳變異主要存在于種群間,為69.02%。分子變異(AMOVA)分析結果也同樣顯示,全緣葉綠絨蒿的主要遺傳變異存在于種群間(占63.38669%)。(6)在用SSR計算得到的遺傳距離對全緣葉綠絨蒿不同居群進行UPGMA聚類時,居群(BM)首先分離為一枝,與其他居群聚為第Ⅳ類;居群(BYQ)與居群(YLXS)聚為一枝、居群(MDK)與居群(QJYS)聚為一枝,與居群(NMC)聚為第Ⅰ類;居群(HY)與居群(BLS)為一枝,與居群(DR)聚為第Ⅱ類;居群(DDS)與居群(CD)聚為一枝,與居群(BMXS)、居群(SJLS)、居群(JZWS)、居群(YS)、居群(CS)聚為第Ⅲ類。(7)ISSR和SSR標記計算出的種群間基因流(Nm)值分別為0.3069和0.2244,均小于1,說明遺傳漂變在全緣葉綠絨蒿16個居群間的遺傳分化中所起作用較大。利用TFPGA對基于ISSR和SSR標記的遺傳距離,與地理距離之間進行Mental相關性檢驗,兩種標記計算結果顯示P值均大于0.05,說明遺傳距離與地理距離間相關性不顯著,地理距離對居群間的遺傳分化沒有明顯影響。
【學位單位】：西南林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S68
【部分圖文】：

圖 2-1 全緣葉綠絨蒿的取樣點位置Fig.2-1 Sampling point geographical location of M.integrifolia器設備勻漿機、自動高壓滅菌鍋、電子天平、渦旋混合器、恒溫水浴鍋制冰機、移液槍、量筒、燒杯、微波爐、臺式高速冷凍多功能離純水機、Nano Drop 2000 紫外分光光度計、Eppendorf 梯度 PC成像系統(tǒng)、DYY~6C 型電泳儀（北京六一）、DYCP-33A 型電泳JY-SCZ2+型垂直電泳儀（北京君意）、JY-JX5 型垂直電泳儀（00C 型電泳儀（北京君意）等。劑要試劑 提取試劑：液氮、2% CTAB 溶液、10% CTAB 溶液、0.5M EDTA

圖 3-1 4 種方法提取DNA的凝膠電泳圖Fig.3-1 Electrophoresis of DNA extracted by four methods盒法、改良的 CTAB 法和擎科試劑盒法提取的 DNA下游 PCR 試驗的要求，但根據(jù)試驗結果和試驗的簡n 試劑盒法的 DNA 提取成本最高，改良的 CTAB 法的本研究選擇采用擎科試劑盒法進行全緣葉綠絨蒿的 泳檢測結果如下圖 3-2 所示。

圖 3-1 4 種方法提取DNA的凝膠電泳圖Fig.3-1 Electrophoresis of DNA extracted by four methodsQiagen 試劑盒法、改良的 CTAB 法和擎科試劑盒法提取的 DNA，在濃度和純度上均能滿足下游 PCR 試驗的要求，但根據(jù)試驗結果和試驗的簡易性、經(jīng)濟性原則，Qiagen 試劑盒法的 DNA 提取成本最高，改良的 CTAB 法的 DNA 提取時間最長，因此本研究選擇采用擎科試劑盒法進行全緣葉綠絨蒿的 DNA 提取，提取的 DNA 電泳檢測結果如下圖 3-2 所示。

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本文編號：2824271