【摘要】：獼猴桃營(yíng)養(yǎng)豐富,特別是維生素C含量高,是世界上主要水果之一。由丁香假單胞桿菌獼猴桃變種細(xì)菌引起的潰瘍病是獼猴桃種植的最大威脅,發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可以毀滅果園。目前獼猴桃潰瘍病在我國(guó)獼猴桃主要產(chǎn)區(qū)、主要栽培品種中都有發(fā)現(xiàn),并呈逐年加重之勢(shì)。建立獼猴桃離體再生與繁殖技術(shù)不僅可以用于快速繁殖優(yōu)良獼猴桃品種和獼猴桃轉(zhuǎn)基因研究,而且還可以用于培育無(wú)病毒、無(wú)潰瘍病病原菌的獼猴桃植株。美味獼猴桃‘金魁’具有品質(zhì)佳、豐產(chǎn)性好、抗逆性強(qiáng)、耐貯運(yùn)、貨架期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn),近十多年來(lái)是我國(guó)獼猴桃的主栽品種之一。但'金魁'獼猴桃扦插生根比較困難,生產(chǎn)上常用嫁接繁殖。本項(xiàng)目以'金魁'獼猴桃莖段和成熟葉為外植體,研究了植物生長(zhǎng)物質(zhì)、基本培養(yǎng)基對(duì)不定芽的誘導(dǎo)、芽的增殖與生根的影響,以及組培苗移栽技術(shù);在此基礎(chǔ)之上,以帶內(nèi)生細(xì)菌的芽為材料,研究了脫除組培苗中內(nèi)生細(xì)菌的方法,主要取得了以下結(jié)果。1.對(duì)果園生長(zhǎng)的'金魁'獼猴桃枝條進(jìn)行表面消毒后,將枝條切成帶芽的莖段,接種在含0.5mg/L BA(6-芐基氨基嘌呤)和0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2 MS培養(yǎng)基(大量元素減半的MS培養(yǎng)基)上,大約43%的莖段長(zhǎng)出新的幼莖,但所有莖段基部出現(xiàn)黃色或者白色細(xì)菌污染。將幼莖切下接種到新鮮的培養(yǎng)基上后,所有幼莖基部切口處也全部出現(xiàn)細(xì)菌污染。這表明本試驗(yàn)所用的'金魁'獼猴桃枝條的內(nèi)部帶菌嚴(yán)重。2.在 1/2 MS 培養(yǎng)基上,0.2 mg/L NAA(萘乙酸)和 1-5 mg/L BA 或 1-2 mg/L TDZ(噻苯隆)的組合均可以誘導(dǎo)'金魁’獼猴桃成熟葉形成愈傷組織和不定芽,但效果差異很大,TDZ比BA更有利于不定芽的誘導(dǎo)。在含0.2 mg/L NAA和5 mg/L BA的培養(yǎng)基上,愈傷組織誘導(dǎo)率為100%、不定芽誘導(dǎo)率為50%,而在含0.2 mg/L NAA和1 mg/L TDZ的培養(yǎng)基上,愈傷組織誘導(dǎo)率為100%、不定芽誘導(dǎo)率為92%。3.在含細(xì)胞分裂素的增殖培養(yǎng)基中添加0.3-0.5 mg/L赤霉素(GA3)可以顯著促進(jìn)芽的伸長(zhǎng),提高增殖效率。同對(duì)照相比,0.3-0.5 mg/L赤霉素可以使繁殖系數(shù)提高3-4倍。3.在含細(xì)胞分裂素的增殖培養(yǎng)基中添加0.3-0.5mg/L赤霉素(GA3)可以顯著芽的伸長(zhǎng),因而使芽的繁殖系數(shù)提高3-4倍。4.將伸長(zhǎng)的芽切成帶芽的小段(莖段)接種在含不同種類(lèi)、不同濃度細(xì)胞分裂素的增殖培養(yǎng)基(含0.3 or 0.5mg/L GA3)上,發(fā)現(xiàn)BA比TDZ、激動(dòng)素(KT)、玉米素(ZT)能更有效地促進(jìn)芽的增殖,最佳濃度為0.3-0.5mg/L;在含0.3mg/LGA3和0.3或0.5 mg/LBA培養(yǎng)基上,每個(gè)莖段上的芽均能生長(zhǎng)、伸長(zhǎng),形成新幼莖,并且新幼莖上的1-2個(gè)側(cè)芽也能生長(zhǎng)伸長(zhǎng),一個(gè)月可以增殖4.5倍以上。5.在相同的BA和NAA組合下,MS培養(yǎng)基比B5,CF和WPM等基本培養(yǎng)基更有利于'金魁'獼猴桃芽的增殖。6.增殖培養(yǎng)基上所增殖的幼莖(2-3 cm長(zhǎng))在含0.7或1 mg/LIBA的1/2MS培養(yǎng)基上可以100%的生根,再生植株平均有5.2和8.5條根。但在含1 mg/L IBA培養(yǎng)基上,許多再生植株基部形成較大的愈傷組織,而且根多由愈傷組織形成;而在含0.7 mg/L IBA培養(yǎng)基上,再生植株無(wú)明顯的愈傷組織,根直接從幼莖基部發(fā)生。7.在含0.7 mg/L IBA培養(yǎng)基上再生的植株經(jīng)過(guò)溫室里煉苗一個(gè)月后,移到室外自然環(huán)境,生長(zhǎng)健壯,移栽三個(gè)月后的成活率達(dá)到96%。8.以帶內(nèi)生菌的幼莖為材料,分離不同大小的莖尖在含1 mg/LBA和0.2mg/LNAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行脫菌培養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)0.5 mm長(zhǎng)的莖尖脫菌效果較好。通過(guò)對(duì)脫菌芽進(jìn)行四代培養(yǎng),可以得到?jīng)]有內(nèi)生細(xì)菌的無(wú)菌芽。脫菌芽及其再生植株的脫菌效果通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)和PCR方法得到證實(shí)。
【學(xué)位授予單位】：湖北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S663.4
【圖文】：

帶頂芽的莖段都能伸長(zhǎng)，而不帶頂芽的莖段只有部分（大約５０－６０％）可以長(zhǎng)出逡逑１個(gè)幼蓮；在含０．１邋ｍｇ／Ｌ邋ＢＡ的培養(yǎng)基上，大約９０％的芽段可以長(zhǎng)出１個(gè)幼基在含０．３逡逑和０．５邋ｍｇ／Ｌ邋ＢＡ的培養(yǎng)基上，每個(gè)芽段可以長(zhǎng)出２－３個(gè)幼莖（圖１Ｄ），因而X椫誠(chéng)凳義希ǎ矗叮矗梗┫災(zāi)哂諼蓿攏梁停埃卞澹恚紓體澹攏戀拇恚ū恚玻�。辶x希保跺義

本文編號(hào)：2772608