【摘要】：干巴菌(Thelephore ganbajun Zang)是一種云南地方性的野生食用菌,屬擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、革菌科(Thelephoraceae)、革菌屬(Thelephora),能與多種松科植物共生,是一種外生菌根真菌。干巴菌子實(shí)體不像其它腐生食用菌可以在有機(jī)質(zhì)上培養(yǎng)獲得,目前還不能人工馴化栽培,過度采摘導(dǎo)致其瀕臨滅絕和生態(tài)退化,已嚴(yán)重制約干巴菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展。本項(xiàng)研究擬通過對自然生長的干巴菌子實(shí)體形成的菌塘情況與牛肝菌(Boletusspp.)子實(shí)體、須腹菌(Rhizopogon spp.)子實(shí)體形成的菌塘情況進(jìn)行對比觀察,為干巴菌菌根的形成和干巴菌子實(shí)體的形成提供形態(tài)依據(jù):通過對干巴菌菌絲體侵染思茅松(Pinus kesiya var.langbianensis)、云南松(Pinus yunnanensisFaranch)幼苗的研究,探索干巴菌菌根的形成情況;采集云南省四個樣地干巴菌菌塘土樣及非菌塘土樣,用傳統(tǒng)平板培養(yǎng)的方法分離培養(yǎng)細(xì)菌和真菌,并用Illunina Miseq高通量測序技術(shù)對菌塘土樣和非菌塘土樣中的真菌和細(xì)菌進(jìn)行ITS序列與16SrDNA的V3、V4區(qū)測序,比較兩種土樣中免培養(yǎng)的真菌及細(xì)菌群落的多樣性及異同,為干巴菌、美味牛肝菌(Boletus edulis)、松茸(Tricholoma matsutake)等為代表的食用菌根真菌人工栽培提供理論支撐。主要的研究結(jié)果如下:1、通過觀察發(fā)現(xiàn)干巴菌菌塘、牛肝菌菌塘和須腹菌菌塘中存在大量的菌根及菌絲體,三種菌根在形態(tài)結(jié)構(gòu)上具有一定差異,可作為輔助的方法來鑒定和監(jiān)測相應(yīng)的真菌物種。2、在云南松、思茅松幼苗上均成功合成了干巴菌菌根,其中思茅松扦插幼苗上形成的菌根有菌套,菌根數(shù)量較多,生長狀態(tài)最好。3、用傳統(tǒng)平板分離法,從菌塘土樣中分離純化出53株真菌、102株細(xì)菌,從非菌塘土樣中分離出65株真菌、60株細(xì)菌。經(jīng)過ITS和16S rDNA測序構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分析,結(jié)果表明兩種土樣的真菌和細(xì)菌的多樣性存在一定的差異,但優(yōu)勢菌屬相同,真菌優(yōu)勢菌屬均為青霉菌屬(Penicillium)、木霉屬(Trichoderma)以及被孢霉屬(Mortierella);細(xì)菌優(yōu)勢菌屬均為芽孢桿菌屬(Bacillus)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、鏈霉菌屬(Streptomyces)。對微生物免培養(yǎng)高通量測序獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,菌塘土樣中細(xì)菌和真菌的多樣性大于非菌塘土樣中,但差異不顯著,四個樣地菌塘土樣中的微生物組成相似。
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S646
【圖文】：

圖１菌塘圖逡逑

植物的小側(cè)根。但不同于牛肝菌形成的子實(shí)體與菌根間有一層菌絲，菌根與在實(shí)逡逑體能輕易分離，干巴菌不易于形成其子實(shí)體的菌根分離，其基部依附于主根生長。逡逑從還未完全形成子實(shí)體的干巴菌中可以看到（圖２）：干巴菌緊緊依附于主根，這一逡逑菌根聚合物頂部已有子實(shí)體的顏色及形狀特征。在解剖鏡下觀察這一結(jié)構(gòu)，是由逡逑大量老化的菌根聚集，包裹著大量的菌絲體（圖２－ｂ），在這些老化菌根中存在由緊逡逑密的菌絲構(gòu)成的類似根狀的結(jié)構(gòu)，呈深灰白色，主要分布于菌根聚集結(jié)構(gòu)的頂端逡逑位置（圖２－ｃ），進(jìn)一步證明干巴菌子實(shí)體由菌根聚集菌套加厚形成。逡逑ｍｍ逡逑圖２干巴菌塘未形成子實(shí)體的菌根逡逑（ａ：相機(jī)拍攝，ｂ：解剖鏡１０ｘ２．０，邋ｃ邋：解剖鏡１０ｘ４．０倍鏡拍攝）逡逑２．１．２菌根分子鑒定結(jié)果逡逑對采集到的干巴菌，牛肝菌、須腹菌菌根提�。模危�，以所提菌根ＤＮＡ為模逡逑版，用ＩＴＳ４和ＩＴＳ５作為引物擴(kuò)增ＩＴＳ區(qū)段，電泳檢測，獲得單一的

圖３菌根外部形態(tài)及解剖結(jié)構(gòu)逡逑注：Ａ、Ｂ、Ｃ分別為干巴菌、牛肝菌、須腹菌菌根結(jié)構(gòu)。從左到右依次為為菌根形態(tài)圖，于逡逑解剖鏡１０ｘ２．５倍鏡下拍攝。石蠟切片圖，分別在顯微鏡１０ｘ２０、１０ｘ４０倍下拍攝。ＨＭ菌套；逡逑ＨＮ哈蒂氏網(wǎng)逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2765082