發(fā)布時間：2020-07-21 19:54

【摘要】：露地菊(Chrysanthemum×grandiflora)因花期長,花多而密,花色鮮艷,具有較強的抗逆性等特點成為近幾年逐漸興起的城市綠化地被植物。目前的研究主要集中在提高露地菊的園藝觀賞性,隨著城市環(huán)境的日益惡化,提高露地菊的抗逆性以適應(yīng)惡劣的空氣和土壤環(huán)境,擴大露地菊在城市園林綠化中的應(yīng)用范圍尤為重要。本文對轉(zhuǎn)基因露地菊‘紐9717’進行Northern blot分析后,對其進行干旱脅迫,從形態(tài)觀察、生理指標(biāo)和光合及熒光特性三個方面對轉(zhuǎn)基因露地菊‘紐9717’進行干旱耐性分析。主要研究結(jié)果如下:1.對轉(zhuǎn)ClNAC9基因露地菊‘紐9717’進行了Northern雜交檢測和分析。利用地高辛標(biāo)記物合成雜交差異探針,運用CTAB法對野生型植株和轉(zhuǎn)基因植株提取RNA,檢測總RNA純度和質(zhì)量,經(jīng)過甲醛變性凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜過夜,雜交、洗膜和CDP-star顯色等過程驗證ClNAC9基因成功轉(zhuǎn)入‘ClNAC9-5’、‘ClNAC9-6’和‘ClNAC9-13’三個株系并表達。2.對野生型和轉(zhuǎn)基因三個株系露地菊進行15d干旱脅迫,對期間露地菊的生長形態(tài)和生理指標(biāo)變化進行觀察測定。隨著干旱脅迫時間的延長,野生型較轉(zhuǎn)基因株系在水分缺失的情況下萎蔫進程更快,轉(zhuǎn)基因株系對干旱脅迫抗性較野生型明顯得到提高。隨著干旱時間的延長,露地菊的生理指標(biāo)出現(xiàn)如下變化:葉片相對含水量和葉綠素含量大幅下降,可溶性蛋白含量先升高后降低,MDA含量大幅度升高,SOD、POD、CAT活性隨著脅迫時間的增加均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。脅迫過程中轉(zhuǎn)基因株系葉綠素含量和相對含水量下降幅度小于野生型,野生型植株MDA含量上升幅度和最大值顯著高于轉(zhuǎn)基因株系,轉(zhuǎn)基因植株的SOD、POD、CAT活性均顯著高于野生型植株。通過對形態(tài)的觀察和生理指標(biāo)的測定、統(tǒng)計分析,可知轉(zhuǎn)入ClNAC9基因增強了露地菊對干旱脅迫的耐受性。3.對野生型和轉(zhuǎn)基因三個株系露地菊‘紐9717’進行持續(xù)15d自然失水的干旱脅迫,在未脅迫、干旱脅迫第5d、10d、15d分別測定各株系植株的光合生理指標(biāo)。在干旱過程中,野生型的氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率、凈光合速率、水分利用率下降幅度均明顯高于轉(zhuǎn)基因株系,最小值均低于轉(zhuǎn)基因株系。通過對各光合生理指標(biāo)的測定及數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,轉(zhuǎn)入的ClNAC9基因明顯增強了露地菊對干旱脅迫的抗性。4.自然干旱脅迫15d對野生型露地菊‘紐9717’和三個轉(zhuǎn)基因株系葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響如下:未進行干旱時野生型和轉(zhuǎn)基因三個株系植株的各葉綠素?zé)晒鈪?shù)相差不多,轉(zhuǎn)基因株系ClNAC9-6和ClNAC9-13的非光化學(xué)猝滅系數(shù)qN較高。野生型和轉(zhuǎn)基因株系ClNAC9-13的初始熒光Fo在整個干旱過程中呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢,Fm和Fv持續(xù)降低,ClNAC9-13的Fm和Fv高于野生型,ClNAC9-5和ClNAC9-6的Fo、Fm和Fv在干旱過程中先下降后上升,說明這兩個株系的耐旱能力較強;野生型和轉(zhuǎn)基因三個株系的Fv/Fm和Fv/Fo均表現(xiàn)出先上升再下降的趨勢,野生型Fv/Fm和Fv/Fo比值較低,下降幅度較大;野生型的qP持續(xù)下降,qN呈現(xiàn)先下降再升高的趨勢,轉(zhuǎn)基因三個株系植株的qP先下降再升高,轉(zhuǎn)基因株系ClNAC9-5和ClNAC9-13的qN一直上升,ClNAC9-6先升高再降低。通過數(shù)據(jù)的測定及統(tǒng)計分析,可知轉(zhuǎn)基因株系ClNAC9-13對干旱的抗性強于野生型,弱于ClNAC9-5和ClNAC9-6。轉(zhuǎn)入的ClNAC9基因明顯增強了露地菊對干旱脅迫的抗性。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S682.11
【圖文】：

放入雜交箱雜交 16-24h。膜：0.1%SDS、2×SSC 混勻，室溫搖洗 68℃搖洗 15min，洗兩次；Maleic acid，室顯色膜正面朝上放入 1.5%blocking 中，室溫輕搖膜取出，放入以 1:10000 比例加入抗體的膜轉(zhuǎn)入 1.5%blocking 中，室溫輕搖 1h。ween-20 用 Maleic acid 稀釋為 0.3%，室溫漂溫下用檢出液漂洗 5min。ml 檢測液、2μl CDP-star 混勻，加到尼龍膜分析AC9 基因檢測差異探針的標(biāo)記

東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 的提取露地菊‘紐 9717’的野生型（WT）和三個轉(zhuǎn)和‘ClNAC9-13’，每個植株為獨立樣本分別于露地菊屬于多糖多酚植物，Northern 雜交對 CTAB 法提取 RNA。提取完成后分別取 3μl 樣-2，條帶較為清晰，明亮，說明提取的總 RNA定四個樣品純度分別為 1.78、1.86、2.01、1.9orthern 雜交 1.8-2.0 的最適純度，可以進行下一WT ClNAC9-5 ClNAC9-6 ClNAC9-13

圖 2-2 露地菊葉片總 RNA 電泳圖gel electrophoresis of total RNA in leaves of Chrysanthemum×地菊的 Northern blot 分析AC9 基因在露地菊‘紐 9717’中的表達情況，對露三個轉(zhuǎn)基因株系‘ClNAC9-5’、‘ClNAC9-6’和析。提取質(zhì)量良好的總 RNA 后，為消除 RNA 中的排列并且變性為分子雜交準(zhǔn)備，對總 RNA 進行甲針進行雜交檢測，轉(zhuǎn)基因株系雜交條帶較為清晰（NA 水平有表達信號，對照組露地菊 WT 沒有雜錄水平表達。WT ClNAC9-6 ClNAC9-13 WT ClNAC9-5C9

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本文編號：2764734