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無核葡萄胚挽救育種與分子標記輔助選擇應用

發(fā)布時間:2020-04-15 18:15
【摘要】:為了探究更適合的無核葡萄胚挽救親本,創(chuàng)制一批無核葡萄新種質,本研究選用6個種子敗育型無核葡萄品種作為母本,3個有核葡萄品種做父本,配置8個雜交組合,運用胚挽救技術,進行離體胚珠培養(yǎng)、胚培養(yǎng)、胚萌發(fā)、成苗、煉苗移栽,在胚挽救工作中一共取回的雜交果粒數(shù)5524個,離體接種的胚珠6632個,獲得發(fā)育的離體幼胚1297個,獲得357個胚挽救雜種株系。采用分子標記輔助選擇,使用無核標記對雜交后代進行早期鑒定,取得以下結果:父母本的基因型對胚挽救均有影響!柖嗤摺龈副緯r,母本為‘紅寶石無核’的雜交組合胚發(fā)育率(19.19%)和成苗率(9.58%)最高,‘無核白雞心’(5.84%,3.28%)、‘火焰無核’(胚發(fā)育率:5.54%,成苗率:1.32%)、‘奇妙無核’(胚發(fā)育率:2.60%,成苗率:0.94%)做母本的雜交組合胚挽救效率依次遞減。以‘陽光玫瑰’為父本的雜交組合中,‘火焰無核’(胚發(fā)育率:5.49%,成苗率:3.30%)做母本的組合胚發(fā)育率和成苗率高于‘赫什無核’(胚發(fā)育率:4.41%,成苗率:1.04%)做母本的組合!北t’做父本時,以‘波爾萊特’(胚發(fā)育率:7.11%,成苗率:3.56%)為母本的雜交組合胚發(fā)育率和成苗率均高于以‘赫什無核’(胚發(fā)育率:3.81%,成苗率:1.17%)為母本的組合。‘陽光玫瑰’做父本的雜交組合胚發(fā)育率較高但成苗率較低。母本基因型對胚挽救效率的影響顯著,父本基因型對胚挽救效率影響較小。使用GSLP1無核標記快速檢測火焰無核×摩爾多瓦、波爾萊特×北冰紅、紅寶石無核×摩爾多瓦三個組合的子代株系,2-4、2-8、5-7、6-64、6-99這5個株系擴增出569bp特異性條帶,初步確定為無核株系。
【圖文】:

技術路線圖,技術路線,文獻綜述


技術路線

過程圖,過程,果粒,幼果


每次更換花粉品種前,將手、鑷子等用75%酒精噴淋,更換新的脫脂棉,避免花粉混雜污染。根據(jù)母本的授粉日期,采集雜種果實。圖2-2 田間雜交過程Figure 2-2 Field hybridization processA.去雄前花序;B.去雄后花序;C.柱頭出現(xiàn)粘液;D.人工授粉;E.掛牌、套袋;F.取幼果A. Inflorescence before emasculation;B. Inflorescence after emasculation;C. The stigma has mucus onit;D. Artificial pollination;E. Hang tag 、Set of paper bag ;F. Take the young fruit2.2.1.3葡萄胚挽救步驟參考課題組前人研究成果,不同雜交組合的果實發(fā)育到一定時間后將幼果采收回實驗室。用剪刀將果穗上所有的果實從果柄處剪下,計數(shù)后將幼果放到干凈的網兜中,在清水下沖洗2-4 h,將果粒及網兜用75%酒精噴淋后放入超凈工作臺,再轉移到絲口瓶中待消毒。用75%酒精浸泡果粒30 s,倒出酒精,用滅菌蒸餾水將果粒沖洗一遍。加入1%濃度的次氯酸鈉溶液沒過所有果粒,浸泡20 min,其間定時搖晃絲口瓶,使消毒效果更充分徹底
【學位授予單位】:西北農林科技大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:S663.1

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