細胞因子是由機體相關(guān)免疫細胞產(chǎn)生的,具有生物調(diào)節(jié)和多種生物學功能的活性物質(zhì)。近幾十年,國內(nèi)外學者熱衷于魚類細胞因子重組蛋白作為疫苗佐劑研究,結(jié)果顯示許多種重組細胞因子蛋白如干擾素(IFN)、腫瘤壞死因子(TNF)、粒細胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細胞介素-1β(IL-1β)等,都能不同程度的增加滅活苗、弱毒菌、亞單位疫苗等常規(guī)疫苗的免疫效應。它在調(diào)節(jié)免疫應答反應過程中起重要作用,被公認為新型疫苗的較好免疫佐劑。本研究以斑點叉尾鮰白細胞介素-1β(IL-1β)基因為研究對象,成功克隆并表達了IL-1β基因重組蛋白；研究了其作為亞單位疫苗佐劑對斑點叉尾鮰的免疫保護效果。1、斑點叉尾鮰IL-1 β基因克隆及原核表達根據(jù)GenBank中公布的斑點叉尾鮰1L-1β1和1L-1β2基因序列(GenBank登錄號分別為：DQ160229、DQ160230),運用生物學軟件設計特異性引物進行PCR擴增,獲得的目的片段IL-1β1和1L-1β2分別克隆至pMD19-T載體；經(jīng)鑒定正確后用BamH I和Xho 1將目的片段從克隆質(zhì)粒上切出,連接到表達載體pET-32a(+),獲得重組質(zhì)粒pET-32a...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1. 魚用傳統(tǒng)佐劑的研究現(xiàn)狀
        1.1 油類佐劑
        1.2 礦物質(zhì)類佐劑
        1.3 微生物來源佐劑
        1.4 動植物來源佐劑
        1.5 免疫刺激復合物佐劑
    2. 魚類細胞因子佐劑
        2.1 細胞因子佐劑的作用機制
        2.2 細胞因子類基因佐劑的優(yōu)越性
        2.3 魚類細胞因子佐劑研究概況
        2.4 魚類白細胞介素-1β(IL-1β)佐劑研究概況
    3. 選題目的意義
第二章 斑點叉尾鮰IL-1B基因克隆及原核表達
    1. 實驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 主要儀器
        1.3 質(zhì)粒和菌株
        1.4 主要試劑
        1.5 主要試劑配制
    2. 實驗方法
        2.1 斑點叉尾鮰IL-1β基因的擴增
        2.2 IL-1β基因的T克隆
        2.3 T克隆IL-1β基因的鑒定
        2.4 原核表達載體pET-32a(+)-1β1/1β2的構(gòu)建
        2.5. 原核表達載體pET-32a(+)-1L-1β1/1β2的表達
        2.6 重組蛋白IL-1β1/1β2的制備與純化
        2.7 Western-blot檢測重組蛋白特異性
    3. 結(jié)果
        3.1 斑點叉尾鮰1L-1β1/β2基因的擴增、T克隆和鑒定
        3.2 斑點叉尾鮰IL-1β1/β2基因原核表達載體的構(gòu)建
        3.3 重組質(zhì)粒pET-32a(+)-1L-1β1/β2誘導表達、條件優(yōu)化及純化
        3.4 Western-blot檢測重組JL-1β1/β2的特異性
    4. 討論
第三章 重組斑點叉尾鮰IL-1B作為亞單位疫苗佐劑的免疫效果研究
    1. 試驗材料
        1.1 試驗菌株
        1.2 試驗動物
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑
        1.5 主要試劑和培養(yǎng)基的配制
    2. 試驗方法
        2.1 抗原制備
        2.2 免疫
        2.3 采血
        2.4 免疫指標檢測
        2.5 重組蛋白IL-1β1/2對斑點叉尾鮰細胞因子轉(zhuǎn)錄影響
        2.6. 實時熒光定量(Real-time)PCR分析
        2.7 統(tǒng)計學分析
    3. 結(jié)果
        3.1 抗體水平檢測
        3.2 血清殺菌活性檢測
        3.3 ACH₅₀活性檢測
        3.4 血清溶菌酶活力檢測
        3.5 死亡率和相對免疫保護率
        3.6 Real-time PCR分析斑點叉尾鮰IL-1β和TNF-α的轉(zhuǎn)錄表達變化
    4. 討論
參考文獻
致謝



本文編號：4015245