溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)屬革蘭氏陰性菌,是重要的條件致病菌,能夠引起魚(yú)類(lèi)的弧菌病,對(duì)海洋魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。全面了解溶藻弧菌的致病機(jī)制將有助于開(kāi)發(fā)高效疫苗。目前鑒定的與溶藻弧菌致病性相關(guān)的毒力因子有群體感應(yīng)系統(tǒng)、分泌系統(tǒng)、鐵載體攝取系統(tǒng)、運(yùn)動(dòng)性和生物被膜等,其中群體感應(yīng)系統(tǒng)全局調(diào)控毒力因子的表達(dá)。溶藻弧菌群體感應(yīng)系統(tǒng)的中樞元件AphA和LuxR是全局性的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,可調(diào)控多種目的基因的表達(dá),而人們對(duì)aphA和luxR本身受到哪些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的調(diào)控作用卻知之甚少。為了尋找溶藻弧菌中調(diào)控aphA和luxR的轉(zhuǎn)錄因子,我們構(gòu)建了一個(gè)細(xì)菌單雜交系統(tǒng)。利用該系統(tǒng)分別篩選了aphA和luxR的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,并對(duì)其中兩個(gè)因子的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了較為深入的分析,為解析細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)介導(dǎo)細(xì)胞密度信號(hào)和其他生理信號(hào)調(diào)控基因表達(dá)并表現(xiàn)多細(xì)胞群體行為打下了良好基礎(chǔ)。本論文首先在商業(yè)化細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)的基礎(chǔ)上改造得到一個(gè)新型的細(xì)菌單雜交系統(tǒng),并構(gòu)建了含有285個(gè)基因的溶藻弧菌轉(zhuǎn)錄因子文庫(kù)。從文庫(kù)中,分別篩選到了 99個(gè)aphA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子及76個(gè)luxR的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,它們分布...

【文章頁(yè)數(shù)】：131 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１１?ＬＴＴＲ依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄調(diào)控經(jīng)典模型示意圖１１１８１??．．－

????（ＬｙｓＲ）?ｌｙｓＲ??圖１．１１?ＬＴＴＲ依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄調(diào)控經(jīng)典模型示意圖１１１８１??Ｆｉｇ．?１．１１?Ａ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｍｏｄｅｌ?ｆｏｒ?ＬＴＴＲ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ....

圖１．１４細(xì)菌單雜交系統(tǒng)＿??

Ｋａｎ??［Ｒｅｐｏｒｔｅｒ?Ｐｌａｓｍｉｄｓ?Ｊ?Ｚｉｎｃ?Ｆｉｎｇｅｒ?Ｐｌａｓｍｉｄｓ??圖１．１５鑒定鋅指－ＤＮＡ相互作用的單雜交系統(tǒng)［｜２７］??Ｆｉｇ．?１．１５?Ｏｎｅ－ｈｙｂｒｉｄ?ｓｙｓｔｅｍ?ｆｏｒ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｚｉｎｃ?ｆｉｎｇｅｒ－ＤＮＡ?ｉ....

圖２．１溶藻弧菌群體感應(yīng)系統(tǒng)??Ｆｉｇ．?２．１?Ｑｕｒｏｍ?ｓｅｎｓｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ．??

溶藻弧菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)類(lèi)似于哈維氏弧菌群體感應(yīng)系統(tǒng)，有三套平行的信??號(hào)通路，含三種信號(hào)分子ＡＩ－１、ＡＩ－２和ＣＡＩ－１，分別由ＬｕｘＭ、ＬｕｘＰ及ＣｑｓＡ合??成（圖２．１）。當(dāng)細(xì)菌濃度較低時(shí)，溶藻弧菌合成的三種信號(hào)分子濃度較低，分泌??到胞外含量較少，不能被ＬｕｘＮ、Ｌｕｘ....

圖３．２?？／？／ｉ忍影響仍／７的表達(dá)??Ｆｉｇ．?３．２?ＡｐｈＢ?ｒｅｇｕｌａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｓｐ．?Ａ．?ＨＰＡ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?

將相同劑量的野生株ＥＰＧＳ、缺失株及�。粒担匮a(bǔ)株通過(guò)肌肉注射注入斑??馬魚(yú)體內(nèi)，記錄４天內(nèi)因溶藻弧菌感染而發(fā)生死亡的個(gè)數(shù)，比較三者之間的存活??率差異（圖３．１Ｂ）。該實(shí)驗(yàn)中所用的斑馬魚(yú)體長(zhǎng)均在３?ｃｍ左右，并經(jīng)過(guò)２周馴養(yǎng)，??體征穩(wěn)定。結(jié)果顯示，注射野生株后的斑馬魚(yú)的存活率僅....

本文編號(hào)：3960285