由鱖傳染性脾腎壞死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)引起的鱖虹彩病毒病是危害鱖養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)最主要疫病,而疫苗接種是預(yù)防該病最為有效的技術(shù)手段。在疫苗制備過程中,安全性和效力是評價疫苗質(zhì)量重要指標,而滅活快速檢驗及抗原含量測定是評價滅活疫苗安全性和效力的關(guān)鍵技術(shù),因此本論文針對ISKNV滅活疫苗制備中關(guān)鍵問題,開展了ISKNV滅活快速檢驗及有效抗原含量測定方法研究及應(yīng)用,旨在提高ISKNV滅活疫苗生產(chǎn)效率和疫苗質(zhì)量,取得的主要結(jié)果如下:1、從ISKNV感染CPB細胞轉(zhuǎn)錄譜中篩選并驗證病毒早期基因ORF099基因表達量最高,以該基因轉(zhuǎn)錄本作為靶標,建立了基于熒光定量RT-PCR監(jiān)測病毒mRNA的滅活快速檢測方法。首先,以含ISKNV ORF099基因質(zhì)粒作為模板,采用qPCR方法繪制了CT值與質(zhì)�？截悢�(shù)的標準曲線,其線性方程為CT=-3.42lgx+39.455(R2=0.998),最低檢測限為3拷貝/μL,重復試驗結(jié)果顯示組間和組內(nèi)變異系數(shù)均小于2%。病毒轉(zhuǎn)錄本靈敏度實驗顯示在第7 d即可從接種1個拷貝病毒的細胞中檢測出...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

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圖2-1Real-timePCR絕對定量標準曲線

圖2-1Real-timePCR絕對定量標準曲線ThestandarddilutionseriesofabsolutelyquantitR的靈敏度和重復性pMD099各稀釋度樣品進行熒光定量PC

圖2-2基于ORF099基因的ISKNV熒光定量PCR檢測方法的靈敏度和重復性

ORF099基因的定量分析。(a)(b)圖2-2基于ORF099基因的ISKNV熒光定量PCR檢測方法的靈敏度和重復性(a)1-11．質(zhì)�？截悢�(shù)分別為3×1010、3×109、3×108、3×107、3×106、3×105、3×104、3×103、3×102、3×101、3....

圖2-3ISKNV感染CPB細胞總RNA中g(shù)DNA去除驗證（誤差線表示標準差的值）

(a)(b)圖2-3ISKNV感染CPB細胞總RNA中g(shù)DNA去除驗證（誤差線表示標準差的值）（a）表示稀釋病毒液接種CPB細胞7d（U-A，R-A）和11d（U-B，R-B）后提取的R品，U-A\U-B表示未去除gDNA的RNA，R-A....

圖2-4熒光定量RT-PCR檢測ISKNV感染CPB細胞后病毒基因轉(zhuǎn)錄數(shù)量（誤差線表示標準差的值）

2-4熒光定量RT-PCR檢測ISKNV感染CPB細胞后病毒基因轉(zhuǎn)錄數(shù)量（誤差線表示標準差的值）Fig.2-4qRT-PCRdetectionofISKNVtranscriptsafterISKNVinfectedCPBcells(error....

本文編號：3938292