牙鲆(Paralichthysolivaceus)是研究魚(yú)類變態(tài)發(fā)育的理想模型。甲狀腺激素(Thyroid Hormone,TH)在牙鲆變態(tài)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著決定性作用。甲狀腺激素的生理作用主要是通過(guò)甲狀腺激素受體(Thyroid Hormone Receptors,TRs)發(fā)揮,TRs有TRα和TRβ兩種亞型。TR通過(guò)結(jié)合甲狀腺激素反應(yīng)元件(TRE)的特異性DNA序列—AGGT(C/A)A來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。為找出TH直接調(diào)控的靶基因,本研究以甲狀腺激素受體TRαA、TRβ為對(duì)象,在HEK293T細(xì)胞中表達(dá)并純化了牙鲆p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ融合蛋白,采用一種目的基因循環(huán)擴(kuò)增與篩選(CAST,Cyclic Amplification and Selection of Target)的方法,得到一些與融合蛋白結(jié)合的特異性序列,對(duì)比牙鲆基因組后并用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)鑒定出TH調(diào)控的靶基因。主要結(jié)果如下:1.牙鲆TRαA、TRβ真核表達(dá)載體構(gòu)建及融合蛋白表達(dá)純化取實(shí)驗(yàn)室已有的p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ重組真核表達(dá)載體,TA克隆...

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

圖2-1p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ重組質(zhì)粒目的片段驗(yàn)證

圖2-2p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ融合蛋白表達(dá)驗(yàn)證

圖2-3隨機(jī)文庫(kù)驗(yàn)證

圖2-4識(shí)別序列驗(yàn)證

本文編號(hào)：3882861