中華絨螯蟹是我國(guó)重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)動(dòng)物品種,是長(zhǎng)江流域居民的重要傳統(tǒng)食物。隨著對(duì)其集約化養(yǎng)殖的大規(guī)模發(fā)展,由細(xì)菌,病毒或立克次氏體引起的各種疾病隨之大規(guī)模爆發(fā),造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此針對(duì)該物種先天免疫系統(tǒng)以及生物防御機(jī)制的深入研究刻不容緩。先天免疫和適應(yīng)性免疫(獲得性免疫)是動(dòng)物宿主(Host)防御病毒、細(xì)菌和寄生蟲(chóng)等病原體(Pathogen)的兩種免疫防御形式,兩者間本質(zhì)的區(qū)別在于：適應(yīng)性免疫包括抗原特異性識(shí)別和免疫記憶,而先天免疫則沒(méi)有。目前認(rèn)為,先天免疫存在于所有后生動(dòng)物中,而適應(yīng)性免疫則僅存在于高等脊椎動(dòng)物。無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫“非己”識(shí)別的基礎(chǔ)是其體內(nèi)存在某些模式識(shí)別受體(PRRs),能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合病原體表面保守的病原相關(guān)分子模式(PAMPs),如脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和葡聚糖(GLU)等。通過(guò)識(shí)別PAMPs,這些受體可以激活免疫系統(tǒng)中的蛋白酶以及通過(guò)免疫細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引發(fā)免疫反應(yīng)。本研究通過(guò)RNA-Seq高通量二代測(cè)序技術(shù),構(gòu)建了中華絨螯蟹血細(xì)胞經(jīng)病原相關(guān)模式分子差異誘導(dǎo)后的轉(zhuǎn)錄組文庫(kù),從中篩選得到了無(wú)脊椎動(dòng)物重要的模式識(shí)別受體分子。其中C型凝集素蛋...

【文章頁(yè)數(shù)】：134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 無(wú)脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)
        1.1 引言
        1.2 細(xì)胞免疫
        1.3 體液免疫
    第二節(jié) 無(wú)脊椎動(dòng)物免疫特異性分子機(jī)制
        2.1 引言
        2.2 免疫分子通過(guò)基因組分子多樣性產(chǎn)生的免疫特異性
        2.3 免疫分子之間通過(guò)協(xié)同交互作用產(chǎn)生的免疫特異性
        2.4 免疫分子通過(guò)劑量效應(yīng)產(chǎn)生的免疫特異性
    第三節(jié) 研究意義及研究方案
        3.1 研究意義
        3.2 研究方案
第二章 基于RNA-Seq的中華絨螯蟹免疫特異性研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫刺激與樣本收集
        2.2 核酸提取和質(zhì)量檢驗(yàn)
        2.3 基于RNA-Seq的高通量二代測(cè)序及文庫(kù)構(gòu)建
        2.4 數(shù)據(jù)分析
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 核酸提取及質(zhì)量控制
        3.2 測(cè)序結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析
        3.3 序列組裝
        3.4 序列比對(duì)分析和基因注釋
        3.5 KEGG代謝通路注釋分析
        3.6 免疫基因注釋
        3.7 免疫基因的差異誘導(dǎo)表達(dá)特異性分析
    第四節(jié) 討論
第三章 C型凝集素家族分子EsLecA和EsLecG的免疫特異性功能研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫刺激與樣本收集
        2.2 總RNA提取和第一鏈cDNA合成
        2.3 EsLecA和EsLecG的基因全長(zhǎng)克隆
        2.4 序列比對(duì)分析和聚類(lèi)分析
        2.5 EsLecA和EsLecG的組織表達(dá)檢測(cè)
        2.6 LPS免疫刺激后的EsLecA和EsLecG的誘導(dǎo)表達(dá)檢測(cè)
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2.8 重組蛋白表達(dá)載體構(gòu)建
        2.9 重組rEsLectin蛋白的表達(dá)和純化
        2.10 蛋白印記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.11 重組rEsLectins蛋白的微生物凝集活性檢測(cè)
        2.12 重組rEsLectins蛋白的微生物生長(zhǎng)抑制活性檢測(cè)
        2.13 重組rEsLectins蛋白的抗菌活性檢測(cè)
        2.14 重組rEsLectins蛋白的細(xì)胞調(diào)理作用檢測(cè)
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsLecA和EsLecG基因的克隆和序列分析
        3.2 EsLecA和EsLecG的同源序列聚類(lèi)分析
        3.3 EsLecA和EsLecG的組織表達(dá)分析
        3.4 LPS體內(nèi)免疫刺激后EsLecA和EsLecG的誘導(dǎo)表達(dá)模式分析
        3.5 重組rEsLectins蛋白的表達(dá)和純化
        3.6 重組rEsLectin蛋白的微生物結(jié)合活性
        3.7 重組rEsLectin蛋白的微生物凝集活性
        3.8 重組rEsLectin蛋白的微生物生長(zhǎng)抑制活性和抗菌活性
        3.9 重組rEsLectin蛋白的血細(xì)胞調(diào)理活性分析
    第四節(jié) 討論
第四章 肝胰腺特異性表達(dá)C型凝集素家族分子EsLecF的免疫特異性功能研究
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)免疫刺激和樣品收集
        2.2 總RNA的提取和第一條cDNA鏈的合成
        2.3 EsLecF基因cDNA全長(zhǎng)克隆
        2.4 EsLecF基因表達(dá)模式分析
        2.5 重組蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.6 重組rEsLecF蛋白的表達(dá)和純化
        2.7 蛋白印記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.8 重組rEsLecF蛋白的微生物凝集實(shí)驗(yàn)
        2.9 重組rEsLecF蛋白的微生物生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)
        2.10 重組rEsLecF蛋白的抗菌活性檢測(cè)
        2.11 重組rEsLecF蛋白的細(xì)胞調(diào)理活性檢測(cè)
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsLecF基因序列分析
        3.2 EsLecF氨基酸序列聚類(lèi)分析
        3.3 EsLecF的轉(zhuǎn)錄表達(dá)模式分析
        3.4 重組rEsLecF蛋白的表達(dá)與純化
        3.5 重組rEsLecF蛋白的微生物結(jié)合活性
        3.6 重組rEsLecF蛋白的微生物凝集活性
        3.7 重組rEsLecF蛋白的微生物生長(zhǎng)抑制活性和殺菌活性
        3.8 重組rEsLecF蛋白的細(xì)胞調(diào)理活性
    第四節(jié) 討論
第五章 免疫球蛋白超家族基因Dscam的外顯子可變剪切及其免疫誘導(dǎo)特異性研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫刺激和樣品收集
        2.2 總RNA抽提和cDNA第一鏈合成
        2.3 EsDscam基因全長(zhǎng)的克隆
        2.4 EsDscam外顯子的可變剪切檢測(cè)
        2.5 序列比對(duì)分析和聚類(lèi)分析
        2.6 EsDscam基因的組織表達(dá)和免疫誘導(dǎo)表達(dá)檢測(cè)
        2.7 EsDscam跨模型和分泌型可變剪切亞型的檢測(cè)
        2.8 蛋白印記檢測(cè)
        2.9 EsDscam的細(xì)胞定位
        2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsDscam的序列分析
        3.2 EsDscam外顯子可變剪切
        3.3 EsDscam序列比對(duì)分析和聚類(lèi)分析
        3.4 EsDscam的組織表達(dá)特異性
        3.5 EsDscam的差異免疫誘導(dǎo)表達(dá)特異性分析
        3.6 EsDscam的跨膜型和分泌型可變剪切亞型檢測(cè)
        3.7 EsDscam的亞細(xì)胞定位
    第四節(jié) 討論
本研究的特色與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3880763