近年來，水產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，已逐漸成為中國(guó)農(nóng)業(yè)中發(fā)展較快的產(chǎn)業(yè)之一，在全球水產(chǎn)總量中占有舉足輕重的地位。但在我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模不斷壯大的同時(shí)，各種病害也隨之而來。對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)作為我國(guó)海水養(yǎng)殖業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)之一，也深受多種病害困擾，我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)每年因?qū)ξr病害流行造成的損失高達(dá)數(shù)十億元。利用靈敏、高效的病原檢測(cè)技術(shù)加強(qiáng)對(duì)蝦苗種或養(yǎng)殖期特定病原的定期檢測(cè)被認(rèn)為是防控對(duì)蝦病害流行的有效手段。等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)作為一種新興的檢測(cè)手段，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于人類醫(yī)學(xué)、動(dòng)物衛(wèi)生等相關(guān)病原檢測(cè)中。為了加強(qiáng)兩種重要對(duì)蝦病害——對(duì)蝦白斑�。╓hite spot disease，WSD）和黃頭�。╕ellow head disease，YHD）的防控，本研究分別建立了對(duì)蝦白斑綜合征病毒（White spot syndromevirus，WSSV）、黃頭病毒（Yellow head virus，YHV）的快速、高靈敏等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)。 本研究根據(jù)對(duì)蝦WSSV基因組的保守序列設(shè)計(jì)合成5條特異性引物，通過對(duì)反應(yīng)體系中的Mg2+、dNTPs等試劑組分和溫度、時(shí)間等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了WSSV的交叉引物等溫?cái)U(kuò)增（cross primi...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 分子生物學(xué)方法在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病原檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.1.1 等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        1.1.2 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerase chain reaction, PCR）
        1.1.3 限制性酶切技術(shù)
    1.2 幾種水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病原概述
        1.2.1 對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WSSV）
        1.2.2 黃頭病毒（YHV）
第二章 對(duì)蝦白斑綜合征病毒交叉引物等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 病料來源
        2.1.2 DNA 模板的提取及 WSSV 陽性模板的確定
        2.1.3 WSSV-CPA 引物設(shè)計(jì)
        2.1.4 WSSV-CPA 反應(yīng)條件
        2.1.5 WSSV-CPA 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.1.6 WSSV-CPA 的特異性
        2.1.7 WSSV-CPA 產(chǎn)物酶切鑒定
        2.1.8 WSSV 的 CPA 與套式 PCR 檢測(cè)方法的靈敏度比較
        2.1.9 WSSV 的 CPA 與 TagMan 探針法 qPC 方法的靈敏度比較
        2.1.10 WSSV 的 CPA 與 LAMP 方法的靈敏度比較
        2.1.11 WSSV qCPA 檢測(cè)方法的建立
        2.1.12 利用 WSSV-CPA 進(jìn)行實(shí)際樣品檢測(cè)
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 WSSV-CPA 反應(yīng)的優(yōu)化結(jié)果
        2.2.2 WSSV-CPA 方法的特異性結(jié)果
        2.2.3 WSSV-CPA 產(chǎn)物的酶切鑒定結(jié)果
        2.2.4 WSSV-CPA 與 WSSV 套式 PCR 檢測(cè)方法的靈敏度比較結(jié)果
        2.2.5 WSSV-CPA 與 WSSV-qPCR 檢測(cè)方法的靈敏度比較結(jié)果
        2.2.6 WSSV-CPA 與 WSSV-LAMP 檢測(cè)方法的靈敏度比較結(jié)果
        2.2.7 WSSV qCPA 檢測(cè)方法的建立
        2.2.8 利用 WSSV-CPA 檢測(cè)對(duì)蝦組織樣品結(jié)果
    2.3 討論
第三章 黃頭病毒中國(guó)株 rRT-LAMP 檢測(cè)方法的建立
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 病料來源
        3.1.2 RNA 模板的提取
        3.1.3 引物設(shè)計(jì)
        3.1.4 rRT- LAMP 反應(yīng)條件
        3.1.5 rRT- LAMP 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.1.6 rRT- LAMP 產(chǎn)物酶切鑒定
        3.1.7 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.1.8 rRT-LAMP 靈敏度分析及與 rRT-PCR 的比較
        3.1.9 rRT-LAMP 靈敏度分析及與 RT-LAMP 試劑盒的比較
        3.1.10 rRT-LAMP 的特異性檢驗(yàn)
        3.1.11 rRT-LAMP 實(shí)際樣品檢測(cè)
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 rRT-LAMP 反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果
        3.2.2 rRT-LAMP 產(chǎn)物的酶切鑒定結(jié)果
        3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.4 YHV rRT-LAMP靈敏度檢測(cè)分析及與rRT-PCR的比較結(jié)果
        3.2.5 rRT-LAMP靈敏度分析及與RT-LAMP試劑盒的比較
        3.2.6 特異性檢測(cè)結(jié)果
        3.2.7 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果
    3.3 討論
第四章 對(duì)蝦白斑綜合征病毒與黃頭病毒中國(guó)株的分子流行病學(xué)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 對(duì)蝦樣品的來源
        4.1.2 樣品處理
    4.2 WSSV 和 YHV 流行病學(xué)初步分析
        4.2.1 對(duì)蝦種類與病毒陽性比率
        4.2.2 地理位置與病毒陽性比率
        4.2.3 兩種病毒陽性檢出比率
    4.3 討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3852792