甲殼肽(Crustin)是甲殼類動(dòng)物中一類陽(yáng)離子的、富含半胱氨酸的、具有抗菌活性的多肽,在其序列的C末端包含一個(gè)乳清酸性蛋白(WAP)結(jié)構(gòu)域。甲殼動(dòng)物中一共有三種類型的甲殼肽(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型)。他們?cè)诳咕庖叻磻?yīng)中有不同的功能。我們?cè)谌毡灸覍?duì)蝦Marsupenaeus japonicus)中得到了四種甲殼肽的cDNA序列,把它們命名為MjCrus1、2、3、4。四種crustin的開(kāi)放閱讀框序列分別為294bp,375bp,333bp,342bp,編碼含有97,124,110,113個(gè)氨基酸的蛋白序列。所有的四個(gè)甲殼肽均為Ⅰ型甲殼肽。組織分布顯示,MjCrus1、2、3在血細(xì)胞和鰓中表達(dá)量較高,而MjCrus4則呈現(xiàn)出組成型表達(dá)。進(jìn)一步的表達(dá)模式分析顯示,在受到革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌以及白斑綜合征病毒(WSSV)刺激后,四種crustin的表達(dá)模式有差別,其中MjCrus1、3、4在細(xì)菌刺激后上升較為明顯,而MjCrus2則受病毒刺激誘導(dǎo)。四種甲殼肽用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組表達(dá),沒(méi)有檢測(cè)到重組蛋白的抗菌活性。接下來(lái)又檢測(cè)了重組蛋白對(duì)細(xì)菌分泌的蛋白酶的抑制活性,發(fā)現(xiàn)除了MjCru...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一部分 綜述
    第一章 無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)
        1. 模式識(shí)別受體
        2. 細(xì)胞免疫
            2.1 血細(xì)胞的吞噬作用
            2.2 血細(xì)胞的結(jié)節(jié)形成和包囊作用
        3. 體液免疫應(yīng)答
            3.1 血淋巴的凝結(jié)作用
            3.2 酚氧化酶原激活系統(tǒng)介導(dǎo)的黑化作用
            3.3 抗菌肽的產(chǎn)生
    第二章 甲殼肽的研究進(jìn)展
        1. 甲殼肽的結(jié)構(gòu)
        2. 甲殼肽的類型
        3. 甲殼肽功能
            3.1 抗菌功能與蛋白酶抑制劑功能
            3.2 甲殼肽的體內(nèi)功能
    目的意義
    技術(shù)路線
第二部分 日本囊對(duì)蟲(chóng)下四種甲殼肽的功能研宄
    一、前言
    二、材料方法
        1. 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 菌株和載體
            1.3 試劑和儀器
        2. 方法
            2.1. 總RNA的提取
            2.2 第一鏈cDNA的合成
            2.3 基因克隆
            2.4 序列比對(duì)和進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
            2.5 半定量PCR
            2.6 實(shí)時(shí)定量PCR
            2.7 重組蛋白的表達(dá)
            2.8 重組蛋白純化
            2.9 重組蛋白抑制細(xì)菌分泌蛋白酶活性檢測(cè)
            2.10 干擾后的細(xì)菌清除實(shí)驗(yàn)
            2.11 重組蛋白的細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 基因克隆和序列分析
        3.2 序列比對(duì)和進(jìn)化樹(shù)分析
        3.3 四種甲殼肽的組織分布
        3.4 表達(dá)模式分析
        3.5 重組蛋白的表達(dá)和純化
        3.6 重組蛋白可以抑制細(xì)菌所分泌蛋白酶
        3.7 細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        3.8 甲殼肽可以增強(qiáng)對(duì)蝦的弧菌清除能力
    四、討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：3817720