發(fā)布時(shí)間：2023-01-08 16:40

　　在脊椎動(dòng)物中,性腺的發(fā)育和配子的形成及成熟主要受腦或下丘腦-垂體-性腺軸（BPG＆HPG）的調(diào)節(jié)。脊椎動(dòng)物下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素,使垂體分泌促性腺激素（gonadotropin hormones,GtH）,即促卵泡激素（follicle-stimulating hormone,FSH）和促黃體生成素（luteinizing hormone,LH）作用于性腺,誘導(dǎo)并調(diào)控配子的形成。硬骨魚(yú)類(lèi)中,FSH和LH對(duì)生殖調(diào)控功能的實(shí)現(xiàn)依賴(lài)于跟它們的受體相結(jié)合,啟動(dòng)下游信號(hào)傳導(dǎo)通路以及激活相關(guān)蛋白并誘導(dǎo)性激素的合成并且作用于配子的成熟及排放。本文以實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)的金錢(qián)魚(yú)（Scatophagus argus）為研究對(duì)象,運(yùn)用基因克隆技術(shù)、原核表達(dá)系統(tǒng)、組織學(xué)方法、實(shí)時(shí)定量熒光PCR、酶聯(lián)免疫測(cè)定（ELISA）,對(duì)金錢(qián)魚(yú)的促性腺激素基因進(jìn)行克隆與序列分析、原核表達(dá)重組載體的構(gòu)建、重組蛋白的獲得及利用、注射和投喂處理后相關(guān)基因的表達(dá)、以及血清中性類(lèi)固醇類(lèi)激素含量的變化進(jìn)行了研究及分析。本研究相關(guān)結(jié)果如下:（1）目的基因的克隆:設(shè)計(jì)引物并利用基因克隆技術(shù)克隆金錢(qián)魚(yú)LH和FSH的cDNA全長(zhǎng)序列的克隆。金... 

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 下丘腦-垂體-性腺軸（HPG）的簡(jiǎn)介
    1.2 LH和FSH的生理結(jié)構(gòu)及功能
    1.3 LH和FSH的生物合成及作用機(jī)理
    1.4 LH和FSH在硬骨魚(yú)類(lèi)中的研究進(jìn)展
    1.5 硬骨魚(yú)類(lèi)中AMH，StAR，17β-HSD及E2，11-kT的研究
    1.6 研究?jī)?nèi)容
    1.7 技術(shù)路線(xiàn)
第二章 金錢(qián)魚(yú)促性腺激素基因全長(zhǎng)的cDNA克隆
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)
        2.1.2 試劑
            2.1.2.1 主要試劑
            2.1.2.2 相關(guān)試劑的配制
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 組織取材
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 模板cDNA的制備
        2.2.4 引物設(shè)計(jì)
        2.2.5 金錢(qián)魚(yú)GtH全長(zhǎng)的RACE克隆
            2.2.5.1 模板cDNA的 3’RACE
            2.2.5.2 模板cDNA的 5’RACE
            2.2.5.3 金錢(qián)魚(yú)GtH中間片段的克隆擴(kuò)增
            2.2.5.4 目的基因的連接，轉(zhuǎn)化
            2.2.5.5 陽(yáng)性克隆菌的篩選
        2.2.6 金錢(qián)魚(yú)GtH的全長(zhǎng)序列分析
    2.3 結(jié)果
第三章 金錢(qián)魚(yú)促性腺激素重組蛋白的原核表達(dá)及純化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 重組質(zhì)粒r-SaGtH的構(gòu)建
            3.2.1.1 目的基因GtH的擴(kuò)增
            3.2.1.2 克隆載體pEasy-T1-GtH的構(gòu)建
            3.2.1.3 載體質(zhì)粒pEasy-T1-GtH的提取
        3.2.2 重組蛋白r-SaGtH的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
            3.2.2.1 重組蛋白r-SaGtH的粗提
            3.2.2.2 重組融合蛋白r-SaGtH的純化
            3.2.2.3 重組蛋白r-SaGtH的Western Blot檢測(cè)
    3.3 結(jié)果
第四章 金錢(qián)魚(yú)促性腺激素重組蛋白功能的初步驗(yàn)證
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)
        4.1.2 主要試劑、儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 重組蛋白r-SaGtH的注射和投喂實(shí)驗(yàn)
            4.2.1.1 重組蛋白r-SaGtH的注射實(shí)驗(yàn)
            4.2.1.2 重組蛋白r-SaGtH的投喂實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 青鱂性腺的組織學(xué)切片觀(guān)察
            4.2.2.1 青鱂性腺的石蠟切片
            4.2.2.2 青鱂性腺的H&E染色
        4.2.3 金錢(qián)魚(yú)性腺的掃描電子顯微鏡觀(guān)察
            4.2.3.1 掃描電子顯微鏡觀(guān)察中主要試劑的配制
                4.2.3.1.1 固定液Karnovsky溶液的配制方法
                4.2.3.1.2 磷酸鹽緩沖液PB溶液的配制方法
            4.2.3.2 掃描電子顯微鏡觀(guān)察上機(jī)樣品的制備
        4.2.4 金錢(qián)魚(yú)性腺成熟部分相關(guān)基因的表達(dá)分析
        4.2.5 金錢(qián)魚(yú)性腺成熟部分相關(guān)激素的測(cè)定
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 青鱂性腺的組織學(xué)切片觀(guān)察
        4.3.2 金錢(qián)魚(yú)性腺的掃描電子顯微鏡觀(guān)察
        4.3.3 金錢(qián)魚(yú)性腺成熟相關(guān)基因的表達(dá)分析
            4.3.3.1 金錢(qián)魚(yú)促性腺激素受體（SaGtHR）的表達(dá)分析
            4.3.3.2 金錢(qián)魚(yú)生殖軸部分下游基因（Amh，Star，17β-hsd）的表達(dá)分析
        4.3.4 金錢(qián)魚(yú)性腺成熟部分相關(guān)激素的測(cè)定
第五章 小結(jié)和討論
參考文獻(xiàn)
附錄
    碩士期間科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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