本研究以歐亞養(yǎng)殖良種大菱鲆（Scophthalmus maximus）為實(shí)驗(yàn)材料,運(yùn)用組織切片、原位雜交、cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和原核表達(dá)等技術(shù)手段,比較了雌性大菱鲆和小鼠垂體組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞類型和促性腺激素（FSHβ和LHβ）在垂體中分布;篩選出在大菱鲆卵巢發(fā)育過(guò)程中下丘腦、垂體、卵巢和肝臟中的最佳內(nèi)參基因;獲取了大菱鲆促性腺激素共同糖蛋白α亞基（CGα）和LHβ的全長(zhǎng)cDNA序列,分析其生物信息學(xué)特性,查明了其組織表達(dá)和下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸關(guān)鍵基因（fshβ、lshβ、cgα、Gn RH、kiss及kissr）在仔魚早期發(fā)育過(guò)程中表達(dá)規(guī)律;通過(guò)大腸桿菌原核表達(dá)成功制備了大菱鲆FSHβ和LHβ重組蛋白。本研究結(jié)果豐富了大菱鲆生殖內(nèi)分泌調(diào)控機(jī)制研究?jī)?nèi)容,同時(shí)為大菱鲆苗種標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)提供了有效技術(shù)支撐。相關(guān)結(jié)果如下:1.大菱鲆和小鼠垂體結(jié)構(gòu)及激素分泌細(xì)胞解剖學(xué)比較對(duì)性成熟雌性大菱鲆和小鼠垂體進(jìn)行組織學(xué)和組織化學(xué)分析,結(jié)果表明:大菱鲆垂體呈典型的雞心形,背腦室,位于間腦腹側(cè)表面,通過(guò)垂體柄與下丘腦緊密相連。相比之下,小鼠垂體呈橢圓形,中心為灰白色,兩... 

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 硬骨魚類下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸調(diào)控機(jī)制
    1.2 魚類腦垂體結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展
        1.2.1 魚類腦垂體的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2.2 魚類腦垂體研究進(jìn)展
    1.3 促性腺激素釋放激素及kisspeptin對(duì)魚類的生殖調(diào)控
    1.4 魚類促性腺激素研究進(jìn)展
        1.4.1 魚類促性腺激素的類型和結(jié)構(gòu)特征
        1.4.2 硬骨魚類促性腺激素的生理功能及分泌調(diào)控
        1.4.3 魚類促性腺激素的體外重組表達(dá)及其生產(chǎn)中的應(yīng)用
    1.5 本研究的主要內(nèi)容及研究意義
第二章 大菱鲆和小鼠垂體結(jié)構(gòu)及激素分泌細(xì)胞解剖學(xué)比較
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 大菱鲆和小鼠垂體H.E.染色
        2.1.3 大菱鲆和小鼠垂體改良Mallory三色染色
    2.2 統(tǒng)計(jì)分析
        2.2.1 大菱鲆和小鼠垂體各分區(qū)面積百分比
        2.2.2 大菱鲆和小鼠垂體內(nèi)分泌細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和細(xì)胞直徑
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 大菱鲆和小鼠垂體結(jié)構(gòu)特征及細(xì)胞類型
        2.3.2 大菱鲆和小鼠垂體細(xì)胞類型面積比和細(xì)胞直徑的比較
    2.4 討論
第三章 大菱鲆卵巢發(fā)育過(guò)程中內(nèi)參基因的篩選
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        3.1.2 大菱鲆不同發(fā)育時(shí)期卵巢H.E染色
        3.1.3 RNA的提取與cDNA的合成
        3.1.4 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增效率
        3.1.5 實(shí)時(shí)定量RT-PCR
        3.1.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 大菱鲆不同發(fā)育時(shí)期卵巢結(jié)構(gòu)
        3.2.2 內(nèi)參基因qRT-PCR的擴(kuò)增
        3.2.3 大菱鲆卵巢發(fā)育過(guò)程中下丘腦、垂體、卵巢及肝臟組織內(nèi)參基因的Ct值
        3.2.4 geNorm軟件分析內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性
        3.2.5 NormFinder軟件分析內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性
        3.2.6 BesKeeper軟件分析內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性
        3.2.7 大菱鲆卵巢發(fā)育過(guò)程中不同內(nèi)參基因?qū)Rα基因表達(dá)的影響
    3.3 討論
第四章 大菱鲆促性腺激素亞基CGα和LHβ的cDNA克隆及HPG軸關(guān)鍵基因在早期發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        4.1.2 大菱鲆CGα和LHβ的cDNA序列克隆
        4.1.3 CGα和LHβ序列分析
        4.1.4 大菱鲆CGα、FSHβ和LHβ基因的組織表達(dá)及相關(guān)調(diào)控基因在早期發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)
        4.1.5 大菱鲆和小鼠促性腺激素的原位雜交(ISH)和免疫組織化學(xué)
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 大菱鲆CGα和LHβ的序列特征分析
        4.2.2 大菱鲆CGα和LHβ氨基酸的同源性比較及GTH系統(tǒng)進(jìn)化分析
        4.2.3 大菱鲆CGα、FSHβ和LHβ的組織表達(dá)分析
        4.2.4 FSHβ和LHβ在大菱鲆和小鼠垂體中的定位
        4.2.5 大菱鲆GTHs、GnRH、kiss及 kissr基因在早期發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)分析
    4.3 討論
第五章 大菱鲆促性腺激素FSHβ和LHβ基因原核表達(dá)
    5.1 材料與方法
        5.1.1 樣品采集
        5.1.2 cDNA第一鏈的合成和原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        5.1.3 FSHβ和LHβ原核表達(dá)和Western-blot驗(yàn)證
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.3 討論
結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]魚類促性腺激素基因研究進(jìn)展[J]. 呂紹巾,張?zhí)烀?趙文.  生物學(xué)雜志. 2017(03)
[2]Evaluation of reference genes for quantitative real-time PCR analysis of gene expression during early development processes of the tongue sole（Cynoglossus semilaevis）[J]. MA Qian,ZHUANG Zhimeng,FENG Wenrong,LIU Shufang,TANG Qisheng.  Acta Oceanologica Sinica. 2015(10)
[3]Kisspeptin調(diào)控魚類生殖內(nèi)分泌的研究進(jìn)展[J]. 卓琦.  動(dòng)物學(xué)研究. 2013(05)
[4]脂聯(lián)素受體（AdpR1和AdpR2）和促性腺激素釋放激素受體（GnRHR）及卵泡刺激素（FSH-β）和黃體生成素（LH-β）基因在皖南花豬垂體組織中的表達(dá)[J]. 張凌齊,李云,周杰,田磊磊,李維新,劉力源,張淑靜.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2013(05)
[5]鲆鰈魚類飼料產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展對(duì)策[J]. 高健,廖紅梅.  中國(guó)水產(chǎn). 2010(03)
[6]大菱鲆脾臟cDNA文庫(kù)構(gòu)建、EST序列分析與免疫抗病相關(guān)基因的篩選[J]. 孟亮,陳松林,劉洋.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2009(05)
[7]哺乳動(dòng)物下丘腦-垂體-卵巢軸的研究進(jìn)展[J]. 王凌燕,王樹迎,侯衍猛,譚雷濤.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2005(07)
[8]促性腺激素釋放激素（GnRH）結(jié)構(gòu)與功能及其受體的進(jìn)化發(fā)展[J]. 林浩然.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2004(06)
[9]大黃魚腦垂體組織學(xué)與免疫組織化學(xué)[J]. 翁幼竹,方永強(qiáng),周晶,謝芳靖,劉家富.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2003(01)
[10]海水養(yǎng)殖新品種介紹─—大菱鲆[J]. 雷霽霖.  中國(guó)水產(chǎn). 2000(04)

博士論文
[1]大菱鲆性腺分化以及Mtnrs,kiss/kissr和GnRH在性腺成熟過(guò)程中的表達(dá)特征[D]. 趙春彥.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院海洋研究所) 2017
[2]不同倍性鯽鯉腦垂體細(xì)胞結(jié)構(gòu)和HPG軸相關(guān)基因的表達(dá)及育性研究[D]. 龍昱.湖南師范大學(xué) 2009
[3]中肋骨條藻增殖細(xì)胞核抗原基因表達(dá)量與生長(zhǎng)關(guān)系的研究[D]. 何閃英.中國(guó)海洋大學(xué) 2007

碩士論文
[1]條石鯛促性腺激素基因的克隆、表達(dá)和性類固醇激素分析[D]. 陳圣毅.上海海洋大學(xué) 2014
[2]哈維氏弧菌超氧化物歧化酶的原核表達(dá)及免疫原性的研究[D]. 辛瑞曉.中國(guó)海洋大學(xué) 2011
[3]草魚促性腺激素基因原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[D]. 劉瓊.湖南師范大學(xué) 2011
[4]大菱鲆不同發(fā)育階段消化生理的研究[D]. 陳慕雁.中國(guó)海洋大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3710857