發(fā)布時間：2022-08-13 17:10

　　無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是唯一擁有B群特異性抗原的鏈球菌,也是一種人畜共患、傳染性極強的的病原菌。近年來,由無乳鏈球菌感染羅非魚引起的鏈球菌病,由于其發(fā)病快,死亡率高,且疾病一旦爆發(fā)很難控制,使其嚴重危害羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,并給全球羅非魚的養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。RovS轉錄調(diào)節(jié)因子屬于Rgg家族,是無乳鏈球菌中一個重要的調(diào)節(jié)因子,能夠在轉錄上調(diào)控細菌基因組中多個基因的表達,同時還能夠與細菌中其他調(diào)控系統(tǒng)協(xié)同作用,調(diào)控細菌的生長、繁殖及代謝等生命活動。本研究以羅非魚源無乳鏈球菌ZQ0910 RovS轉錄調(diào)節(jié)因子為研究對象,通過構建rovS基因缺失突變株,比較野生株和突變株的生物學性狀,研究其致病力及相關毒力因子的表達情況,為進一步探討羅非魚源無乳鏈球菌的分子致病機理奠定了理論基礎。利用PCR技術擴增rovS基因上下游同源片段rovS-F、rovS-R,以及紅霉素抗性基因Erm,然后利用溫度敏感型自殺載體pSET4s構建重組質(zhì)粒pSET4s-rF-Erm-r R,通過電轉化的方法將重組質(zhì)粒轉入野生株S.agalactiae ZQ0910中,通... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
1 文獻綜述
    1.1 無乳鏈球菌的研究進展
        1.1.1 無乳鏈球菌的概述
        1.1.2 無乳鏈球菌的流行性
        1.1.3 無乳鏈球菌的致病性
        1.1.4 無乳鏈球菌的感染癥狀
    1.2 無乳鏈球菌相關毒力因子
        1.2.1 莢膜多糖
        1.2.2 分選酶
        1.2.3 ScpB蛋白
        1.2.4 Sip蛋白
        1.2.5 FbsA蛋白
        1.2.6 SodA蛋白
    1.3 調(diào)節(jié)因子
        1.3.1 Rgg家族調(diào)節(jié)因子
        1.3.2 CodY全局轉錄調(diào)節(jié)因子
        1.3.3 CcpA全局調(diào)節(jié)因子
        1.3.4 LuxS調(diào)節(jié)因子
    1.4 本研究的目的意義
2 轉錄調(diào)節(jié)因子RovS基因缺失株的構建
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 主要實驗試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基和相關溶液的配制
        2.1.5 緩沖液的配制
        2.1.6 制備大腸桿菌感受態(tài)所用溶液的配置
        2.1.7 制備無乳鏈球菌感受態(tài)所用溶液的配置
        2.1.8 該實驗所用引物
        2.1.9 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 rovS基因上、下游片段與Erm基因的擴增
        2.2.2 rovS基因上、下游片段與Erm基因的融合
        2.2.3 重組質(zhì)粒pSET4s-rF-Erm-rR的構建和鑒定
        2.2.4 rovS基因缺失株突變株的構建
    2.3 實驗結果
        2.3.1 rovS基因上、下游片段的擴增
        2.3.2 紅霉素抗性基因的擴增
        2.3.3 rovS基因上、下游片段與Erm基因的融合
        2.3.4 重組質(zhì)粒pSET4s-rF-Erm-rR的鑒定
        2.3.5 無乳鏈球菌rovS基因缺失株的篩選
    2.4 討論
3 轉錄調(diào)節(jié)因子RovS的功能分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 實驗試劑
        3.1.5 革蘭氏染色液的配置
    3.2 實驗方法
        3.2.1 突變株的遺傳穩(wěn)定性分析
        3.2.2 生長曲線的繪制
        3.2.3 野生株S.agalactiae ZQ0910和突變株ΔrovS革蘭氏染色的比較
        3.2.4 血瓊脂平板上觀察細菌形態(tài)
        3.2.5 半數(shù)致死量（LD50）的測定
        3.2.6 實時熒光定量PCR
    3.3 實驗結果
        3.3.1 突變株遺傳穩(wěn)定性分析
        3.3.2 生長曲線的比較
        3.3.3 革蘭氏染色的比較
        3.3.4 血瓊脂平板上生物學性狀的比較
        3.3.5 半數(shù)致死量（LD50）的測定
        3.3.6 mRNA的表達差異
    3.4 討論
4 結論
    4.1 羅非魚源無乳鏈球菌轉錄調(diào)節(jié)子RovS缺失株的構建
    4.2 缺失突變株 ΔrovS功能分析
參考文獻
致謝
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本文編號：3677424