凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）具有生長(zhǎng)速度快、肉質(zhì)鮮美、抗病力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，得以在我國(guó)大面積的養(yǎng)殖。然而，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，病害問(wèn)題也日漸凸顯，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。由于對(duì)蝦缺乏獲得性免疫，只能依靠先天免疫系統(tǒng)來(lái)抵御病原的入侵。因而從先天免疫途徑入手探究對(duì)蝦抗病相關(guān)基因?yàn)榻窈蠓布{濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的抗病選育奠定基礎(chǔ)。由酚氧化酶（phenoloxidase，PO）、蛋白酶、模式識(shí)別蛋白和蛋白抑制劑構(gòu)成的酚氧化酶原激活系統(tǒng)（prohenoloxidase-activated system，proPO-AS）是甲殼動(dòng)物重要的識(shí)別和防御系統(tǒng)，直接參與對(duì)非己信號(hào)的識(shí)別，通過(guò)抑制病原體胞外蛋白酶和幾丁質(zhì)酶的活性，增強(qiáng)血細(xì)胞吞噬作用、形成結(jié)節(jié)或包囊以及介導(dǎo)凝集和凝結(jié)，產(chǎn)生殺菌物質(zhì)等，從而在傷口愈合、抑制甚至殺滅病原微生物方面發(fā)揮重要作用。因此，闡明對(duì)蝦酚氧化酶原激活系統(tǒng)中關(guān)鍵分子的功能對(duì)對(duì)蝦抗病免疫的研究具有重要的意義。本研究根據(jù)同源物種基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物，結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、雙鏈RNA干擾技術(shù)、原核表達(dá)載體的構(gòu)建、融合蛋白純化以及生物信息學(xué)分析等，克隆了凡納濱對(duì)蝦QM和... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 我國(guó)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的現(xiàn)狀
    1.2 甲殼動(dòng)物的免疫系統(tǒng)
        1.2.1 器官免疫
        1.2.2 細(xì)胞免疫
        1.2.3 體液免疫
    1.3 RNA 干擾技術(shù)在對(duì)蝦免疫研究中的應(yīng)用
        1.3.1 dsRNA 的干擾機(jī)制
        1.3.2 dsRNA 在免疫基因功能研究中的應(yīng)用
    1.4 對(duì)蝦免疫基因 QM 和 serpin 的研究進(jìn)展
        1.4.1 QM 基因的研究進(jìn)展
        1.4.2 Serpin 基因的研究進(jìn)展
第二章 凡納濱對(duì)蝦 QM 基因的功能研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.1.3 總 RNA 的提取
        2.1.4 cDNA 第一鏈的合成
        2.1.5 LvQM 基因部分 cDNA 序列的獲得
        2.1.6 LvQM 基因的生物信息學(xué)分析
        2.1.7 LvQM 基因雙鏈 RNA 的體外合成
        2.1.8 LvQM 基因重組蛋白的表達(dá)和純化
        2.1.9 利用實(shí)時(shí)定量 qRT-PCR 檢測(cè) LvQM 基因的表達(dá)量
        2.1.10 雙鏈 RNA 注射后對(duì)蝦累積死亡率檢測(cè)
        2.1.11 細(xì)菌清除試驗(yàn)
        2.1.12 酚氧化酶活力測(cè)定
    2.2 結(jié)果和分析
        2.2.1 LvQM 基因的克隆和序列分析
        2.2.2 LvQM 基因氨基酸序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
        2.2.3 LvQM 基因的組織差異表達(dá)
        2.2.4 LvQM 基因在病菌刺激下的時(shí)序表達(dá)
        2.2.5 RNA 干擾后相關(guān)基因表達(dá)量變化
        2.2.6 RNA 干擾后累積死亡率變化
        2.2.7 LvQM 基因重組蛋白的純化
        2.2.8 rLvQM 蛋白對(duì)細(xì)菌的清除
        2.2.9 LvQM 基因?qū)Ψ友趸富盍Φ恼{(diào)節(jié)
    2.3 討論
第三章 凡納濱對(duì)蝦 SERPIN 基因的功能研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 Lvserpin 基因部分 cDNA 序列的獲得
        3.1.3 Lvserpin 基因的生物信息學(xué)分析
        3.1.4 Lvserpin 基因的組織分布
        3.1.5 不同病原刺激下 Lvserpin 基因的時(shí)序表達(dá)
        3.1.6 Lvserpin 基因雙鏈 RNA 的體外合成
        3.1.7 注射 Lvserpin dsRNA 后相關(guān)基因表達(dá)量的檢測(cè)
        3.1.8 雙鏈 RNA 注射后對(duì)蝦累積死亡率檢測(cè)
        3.1.9 Lvserpin 基因重組蛋白的表達(dá)和純化
        3.1.10 蛋白酶活性抑制實(shí)驗(yàn)
        3.1.11 細(xì)菌生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)
        3.1.12 酚氧化酶系統(tǒng)抑制實(shí)驗(yàn)
    3.2 結(jié)果和分析
        3.2.1 Lvserpin 基因的克隆和序列分析
        3.2.2 Lvserpin 基因氨基酸序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
        3.2.3 Lvserpin 基因的組織分布
        3.2.4 Lvserpin 基因應(yīng)對(duì)不同病原刺激的時(shí)序表達(dá)
        3.2.5 雙鏈 RNA 對(duì) Lvserpin 基因沉默
        3.2.6 RNA 干擾后相關(guān)基因表達(dá)量變化
        3.2.7 RNA 干擾后累積死亡率變化
        3.2.8 Lvserpin 基因重組蛋白的表達(dá)和純化
        3.2.9 rLvserpin 蛋白對(duì)蛋白酶活力的抑制
        3.2.10 rLvserpin 蛋白對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制
        3.2.11 rLvserpin 蛋白對(duì)酚氧化酶激活的抑制
    3.3 討論
第四章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和展望
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2011～2012我國(guó)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及展望[J]. 崔和,肖樂(lè).  中國(guó)水產(chǎn). 2012(07)
[2]凡納濱對(duì)蝦生物學(xué)及養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展[J]. 王興強(qiáng),馬甡,董雙林.  海洋湖沼通報(bào). 2004(04)
[3]世界重要養(yǎng)殖品種——南美白對(duì)蝦生物學(xué)簡(jiǎn)介[J]. 張偉權(quán).  海洋科學(xué). 1990(03)



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