雜色鮑幼蟲(chóng)的附著變態(tài)過(guò)程,是其生活史中至關(guān)重要的時(shí)期。該時(shí)期的幼蟲(chóng)敏感而脆弱,死亡率高,直接關(guān)系到其種群分布、數(shù)量變動(dòng)。本研究在實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的雜色鮑EST數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上,采用SMART-RACE技術(shù)共成功克隆得到3條胰島素超家族基因:胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4（insulin-like growth binding protein 4,IGFBP4）、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5（insulin-like growth binding protein 5,IGFBP5）和胰島素樣蛋白（molluscan insulin-like peptide,MIRP）基因的cDNA,分別命名為hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdMIRP。連同實(shí)驗(yàn)室已克隆到的雜色鮑胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7（insulin-like growth binding protein 7,IGFBP7）（hdIGFBP7）,采用實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）和基因沉默等技術(shù)分析上述基因在雜色鮑幼蟲(chóng)附著變態(tài)過(guò)程中的作用。主要的研究結(jié)果如下:1)hdIGFBP4 cDNA全長(zhǎng)為584 bp,為無(wú)脊椎動(dòng)物中首次克隆到IGFBP4基... 

【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 雜色鮑的養(yǎng)殖現(xiàn)狀及幼蟲(chóng)研究
    1.2 無(wú)脊椎動(dòng)物幼蟲(chóng)附著變態(tài)的研究進(jìn)展
        1.2.1 鮑幼蟲(chóng)發(fā)育研究
        1.2.2 海洋無(wú)脊椎動(dòng)物幼蟲(chóng)附著變態(tài)的研究進(jìn)展
    1.3 IGFs系統(tǒng)及胰島素樣蛋白概述
        1.3.1 IGF信號(hào)通路研究進(jìn)展
        1.3.2 IGFBP4的研究進(jìn)展
        1.3.3 IGFBP5的研究進(jìn)展
        1.3.4 IGFBP7的研究進(jìn)展
        1.3.5 無(wú)脊椎動(dòng)物胰島素樣生長(zhǎng)因子研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的與意義
    1.5 主要研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線(xiàn)
        1.5.1 主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.2 主要技術(shù)路線(xiàn)
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器和試劑
        2.1.3 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA的提取 (TRIzol法) 和去除DNA的污染
        2.2.2 合成RT-PCR cDNA第一鏈和PCR擴(kuò)增獲取基因cDNA片段
        2.2.3 SMART-RACE技術(shù)獲取基因全長(zhǎng)
        2.2.4 割膠純化基因片段
        2.2.5 與質(zhì)粒載體連接
        2.2.6 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及篩選
        2.2.7 質(zhì)粒插入片段的檢測(cè)
        2.2.8 質(zhì)粒測(cè)序
        2.2.9 目的基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Real-time PCR) 反應(yīng)體系及條件
        2.2.11 RNAi實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 原核表達(dá)
第3章 結(jié)果
    3.1 雜色鮑各組織總RNA的抽提結(jié)果
    3.2 RACE-PCR擴(kuò)增結(jié)果
    3.3 hdIGFBP4、5、7、hdMIRP生物信息學(xué)分析
        3.3.1 hdIGFBP4 生物信息學(xué)分析
        3.3.2 hdIGFBP5 生物信息學(xué)分析
        3.3.3 hdIGFBP7 生物信息學(xué)分析
        3.3.4 hdMIRP 生物信息學(xué)分析
    3.4 雜色鮑 hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP 基因的表達(dá)特征
        3.4.1 RNAi技術(shù)干擾hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因幼蟲(chóng)的附著率與死亡率
        3.4.2 RNAi后hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因的表達(dá)情況
        3.4.3 干擾后，胰島素/胰島素樣蛋白/胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)通路的表達(dá)情況
    3.5 原核表達(dá)
        3.5.1 重組表達(dá)載體pET-22b-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的構(gòu)建及表達(dá)
        3.5.2 重組表達(dá)載體pET-32a-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的構(gòu)建及表達(dá)
        3.5.3 密碼子預(yù)測(cè)分析
第4章 討論
    4.1 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 4
    4.2 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 5
    4.3 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 7
    4.4 胰島素樣蛋白
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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