本研究以青鱂為模式生物研究半滑舌鰨性別分化相關基因的表達情況，為海水魚基因功能研究提供了新的思路。本研究從三個方面進行闡述：一是異源和同源dmrt1基因過表達載體構建；二是異源和同源dmrt1基因過表達載體在青鳉體內(nèi)的整合和表達分析；三是olcsw1Talen載體在青鱂體內(nèi)基因敲除分析。主要實驗結果如下：1.異源和同源dmrt1基因過表達載體構建。提取半滑舌鰨和青鱂精巢組織RNA，并進行RT-PCR反轉(zhuǎn)錄獲得大量cDNA，通過BamHⅠ和XhoⅠ進行雙酶切，與同樣經(jīng)過這兩種酶雙酶切的pIRES-hrGFP-1a載體進行連接，啟動子為巨噬細胞病毒（CMV）啟動子，分別構建含有半滑舌鰨和青鱂dmrt1基因的過表達載體。分別命名為：pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a和pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a。通過質(zhì)粒提取獲得大量過表達載體質(zhì)粒溶液。2.異源和同源dmrt1基因過表達載體在青鳉體內(nèi)的整合和表達分析。采用顯微注射的方式將兩種過表達載體稀釋至30ng/μl,分別導入到青鱂1細胞受精卵中，比較異源和同源dmrt1基因?qū)η圜毰咛シ趸实挠绊懸约皟煞Ndmrt1基因在青鳉體內(nèi)... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

顯微注射操作過程

2.2.2.3 Talen 載體構建通過克隆得到的青鱂 olcsw1，我們進一步分析該基因結構，并在處設計 Talen 基因靶向敲除位點(圖 2-3)，載體由香港中文大學構建。

上海海洋大學碩士學位論文小 量 制 備 ， 將 制 備 好 的 半 滑 舌 鰨 和 青 鱂 質(zhì) 粒 載 體 分 別 命 名 為pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a 和 pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a（圖 2-4）。

【參考文獻】：
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