主要組織相容性復(fù)合體（Major Histocompatibility Complex，MHC）是存在于所有已知脊椎動物體內(nèi)、與免疫功能密切相關(guān)的基因家族，由它編碼的一類細(xì)胞表面轉(zhuǎn)膜蛋白，能結(jié)合并呈遞內(nèi)源抗原和外源抗原給T淋巴細(xì)胞，激發(fā)機體免疫反應(yīng)。本文以尼羅羅非魚為研究對象，采用同源克隆、RACE-PCR、qPCR等技術(shù)，克隆了尼羅羅非魚MHC α和β2m基因的cDNA，分析了MHC α和β2mcDNA的多態(tài)性，以及MHC α和β2m基因在健康尼羅羅非魚各組織（腦、鰓、肝臟、腸、胃、腎臟、心臟、脾臟、皮膚和肌肉）中的分布以及感染無乳鏈球菌后基因在鰓、腎臟、心臟和脾臟中表達量的變化。結(jié)果如下：一、尼羅羅非魚MHC α全長cDNA的克隆、多態(tài)性及組織表達分析獲得的尼羅羅非魚MHC α cDNA全長為1533bp,其開放閱讀框（Open Reading Frame, ORF）為1053bp。編碼的蛋白質(zhì)分子包含信號肽、MHC結(jié)構(gòu)域、IGc1結(jié)構(gòu)域和跨膜區(qū)，并存在豐富的磷酸化位點。對氨基酸序列進行功能結(jié)構(gòu)域分析的結(jié)果顯示，1-18位為信號肽，209-283位為功能區(qū)（IGc1區(qū)），303-3... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

尼羅羅非魚鰓組織總RNA，M:DL2000核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)；1-3為不同個體的尼羅羅非M123

基酸序列進行功能結(jié)構(gòu)域分析的結(jié)果顯示，1-18 位為信號肽，209-283 位為功能區(qū)（IGc1 區(qū)），303-325 位為蛋白質(zhì)的跨膜螺旋區(qū)（圖 1-2）。圖.1-2 尼羅羅非魚 MHC α 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測注：紅色區(qū)域表示信號肽，黑灰色方框表示 MHC-I 結(jié)構(gòu)域，綠色圓形區(qū)域表示 IGc1 結(jié)構(gòu)域，藍(lán)色表示跨膜螺旋區(qū)。Fig. 1-2 Nile tilapia MHC α protein structure prediction.Note: Red area indicates the signal peptide, black and gray box represents MHC-I domains, green circular2000 bp1000 bp18SSS28SM 1 2 3

圖 1-6 目的基因和內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線a:為目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線，b:內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。Fig.1-6The standard curve of target gene and reference gene.a: the standard curve of the target gene, b: the standard curve of the reference gene.2.5 目的基因和內(nèi)參基因的擴增曲線采用 qPCR 技術(shù)，分別檢測目的基因和內(nèi)參基因在不同樣本中的表達豐度通過 ABI PRISM 7300 熒光定量 PCR 儀（美國 Applied Biosystems）分析得到環(huán)數(shù)與熒光強度的關(guān)系，結(jié)果見圖 1-7。a.

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]赤點石斑魚MHC基因的克隆與多態(tài)性分析[D]. 杜佳瑩.廈門大學(xué) 2008
[2]大菱鲆受哈維氏弧菌感染后的基因差異表達研究[D]. 王傳娟.中國海洋大學(xué) 2007
[3]草魚β2m基因的分子克隆與MHC class Ⅰ多態(tài)性分析及其重組蛋白的鑒定[D]. 楊天耀.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3567974