本實(shí)驗(yàn)從中華鱉（Trionyx sinensis）腸道內(nèi)分離出了對(duì)中華鱉常見致病菌具有較強(qiáng)拮抗作用的潛在益生菌,對(duì)篩選出來的益生菌的特性進(jìn)行檢測和研究,并進(jìn)一步研究了在飼料中添加該益生菌對(duì)中華鱉生長、免疫的影響,為中華鱉養(yǎng)殖行業(yè)中益生菌的應(yīng)用提供基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下：（1）通過點(diǎn)種法初篩和牛津杯法復(fù)篩,從中華鱉腸道篩選到1株對(duì)嗜水氣單胞菌（A eromonas hydrophila）、溫和氣單胞菌（A. sobria）以及豚鼠氣單胞菌（A.caviae）具有拮抗作用的菌株Dec-43。對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)及生理生化特征分析,結(jié)果與屎腸球菌的生理生化特征一致；提取細(xì)菌基因組DNA,通過16S rRNA基因通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,該菌株的16S rRNA基因克隆到了一個(gè)長度為1448pb的片段,經(jīng)測序和序列比對(duì),該片段與Genbank中屎腸球菌的序列相似性達(dá)99%,因此,該菌株確定為屎腸球菌（Enterococcus faecium）。通過單因素試驗(yàn)確定了該菌株的最佳生長溫度、鹽度、初始pH、接種量分別為36℃,鹽度0.6%,培養(yǎng)基初始pH值7,接種量10%；通過正交試驗(yàn),確定了培養(yǎng)基中... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 益生菌簡介
    2 常用益生菌種類
    3 益生菌的篩選
    4 益生菌的主要作用機(jī)理
        4.1 營養(yǎng)作用
        4.2 拮抗作用
        4.3 水質(zhì)調(diào)節(jié)作用
        4.4 益生菌對(duì)宿主免疫作用的影響
    5 益生屎腸球菌
        5.1 屎腸球菌腸道菌素的功能特性
        5.2 對(duì)宿主腸道菌群的調(diào)節(jié)作用
        5.3 對(duì)病原微生物的抑制作用
        5.4 對(duì)宿主生長性能的影響
        5.5 對(duì)宿主免疫功能的影響
        5.6 其他益生作用
    6 本研究的目的和意義
第二章 中華鱉腸道益生菌的篩選、鑒定及生長特性研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株
            1.1.3 培養(yǎng)基
            1.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 中華鱉腸道細(xì)菌的分離
            1.2.2 益生菌的初篩
            1.2.3 益生菌的復(fù)篩
            1.2.4 益生菌的酸耐受實(shí)驗(yàn)
            1.2.5 益生菌的生理生化鑒定以及16S rRNA基因序列分析
            1.2.6 益生菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    2 結(jié)果與分析
        2.1 益生菌的初篩結(jié)果
        2.2 益生菌的復(fù)篩結(jié)果
        2.3 益生菌的酸耐受實(shí)驗(yàn)
        2.4 菌株生理生化結(jié)果分析以及16S rRNA基因序列分析結(jié)果
        2.5 Dec-43的生長曲線
        2.6 不同溫度對(duì)Dec-43生長的影響
        2.7 不同鹽度對(duì)Dec-43生長的影響
        2.8 不同初始pH對(duì)Dec-43生長的影響
        2.9 不同接種量對(duì)Dec-43生長的影響
        2.10 不同碳氮比對(duì)Dec-43生長的影響
    3 討論
第三章 益生菌對(duì)中華鱉生長、免疫的影響
    1 材料方法
        1.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        1.2 實(shí)驗(yàn)飼料
        1.3 實(shí)驗(yàn)分組和動(dòng)物飼養(yǎng)
        1.4 生長性能評(píng)估
        1.5 免疫指標(biāo)測定
            1.5.1 中華鱉血液收集
            1.5.2 制備吞噬原
            1.5.3 血液白細(xì)胞吞噬活性的測定
            1.5.4 溶菌酶活性的測定
            1.5.5 髓過氧化物酶(MPO)活性和血清補(bǔ)體(C3、C4)含量的測定
        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 投喂菌株Dec-43對(duì)中華鱉生長性能的影響
        2.2 菌株Dec-43對(duì)中華鱉非特異性免疫功能的影響
            2.2.1 菌株Dec-43對(duì)中華鱉血液白細(xì)胞吞噬活性的影響
            2.2.2 菌株Dec-43對(duì)中華鱉血清溶菌酶活性的影響
            2.2.3 菌株Dec-43對(duì)中華鱉血清髓過氧化物酶(MPO)活性的影響
            2.2.4 菌株Dec-43對(duì)中華鱉血清補(bǔ)體(C3、C4)含量的影響
    3 討論
第四章 益生菌對(duì)中華鱉感染嗜水氣單胞菌后免疫相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)
    1 材料方法
        1.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        1.2 實(shí)驗(yàn)飼料
        1.3 實(shí)驗(yàn)分組和動(dòng)物飼養(yǎng)
        1.4 嗜水氣單胞菌攻毒
        1.5 樣品收集
        1.6 組織總RNA的提取
            1.6.1 組織勻漿
            1.6.2 分離
            1.6.3 RNA沉淀
            1.6.4 RNA洗滌
            1.6.5 RNA溶解
            1.6.6 RNA的檢測
        1.7 組織cDNA的制備
            1.7.1 去除基因組DNA反應(yīng)
            1.7.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            1.7.3 cDNA模板質(zhì)量檢測
        1.8 Real-Time PCR
        1.9 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 RNA質(zhì)量的檢測
        2.2 反轉(zhuǎn)錄效果的檢測
        2.3 感染嗜水氣單胞菌后肝臟中免疫相關(guān)基因的表達(dá)量的變化
        2.4 感染嗜水氣單胞菌后脾臟中免疫相關(guān)基因的表達(dá)量的變化
        2.5 感染嗜水氣單胞菌后腎臟中免疫相關(guān)基因的表達(dá)量的變化
        2.6 感染嗜水氣單胞菌后腸道中免疫相關(guān)基因的表達(dá)量的變化
    3 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]牙鲆腸道益生菌的分離鑒定及其應(yīng)用研究[D]. 王福強(qiáng).中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
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