隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)高速發(fā)展,魚出血性敗血癥,常引起魚類的死亡,為水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)帶來(lái)經(jīng)濟(jì)損失。魚出血性敗血癥為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中常見流行病,多由致病性氣單胞菌引起。氣單胞菌是可引起人、動(dòng)物、魚的條件性致病菌,并且在我國(guó)廣泛的流行。本研究從患出血性敗血病死亡的鯽魚肝臟中分離病原菌,經(jīng)LB固體培養(yǎng)基劃線分離培養(yǎng)后可見圓潤(rùn)光滑邊緣整齊的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)菌株,挑取單菌落,將其命名為AX002。為進(jìn)一步確定分離菌的致病性,通過(guò)動(dòng)物回歸感染試驗(yàn)測(cè)定該菌對(duì)鯽魚的半致死濃度（LD50）為2.38×107cfu/mL。結(jié)合觀察細(xì)菌在RYAN和RS等培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài),在RYAN培養(yǎng)基上可見深綠色有深核,RS培養(yǎng)基上24h生長(zhǎng)黃色和綠色菌落,綜上可確定為氣單胞菌。通過(guò)全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)檢測(cè)AX002的生化結(jié)果顯示,該菌為維氏氣單胞菌溫和亞種。經(jīng)PCR測(cè)序該菌16srDNA和促旋酶亞基（gyrB）基因,擴(kuò)增結(jié)果分別是為1 179bp和1 100bp。通過(guò)測(cè)序結(jié)果在NCBI上比對(duì)并建立系統(tǒng)發(fā)育樹分析后,可確定AX002為維氏氣單胞菌。生理生化鑒定結(jié)果相同。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,該菌對(duì)阿米卡星、頭孢唑啉、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星等15種抗生... 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：40 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-5分離結(jié)果

.1 細(xì)菌的分離結(jié)果分離得到的優(yōu)化長(zhǎng)勢(shì)的圓潤(rùn)光滑黃色細(xì)菌菌株（見圖 1-5）。.2 動(dòng)物回歸感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果將純化后菌懸液注射到健康鯽魚腹腔，觀察發(fā)病癥狀（見圖 1-6），腹腔注菌懸液后，魚停止攝食，24h 開始大批發(fā)病并且出現(xiàn)個(gè)別死亡現(xiàn)象，發(fā)病魚游緩慢，神經(jīng)癥狀麻痹，幾乎對(duì)外界的刺激沒有反應(yīng)，腹部表面嚴(yán)重充血，泄殖紅腫充血，腹部腫大。48h 后死亡魚條數(shù)開始增多，72h 后開始大批死亡達(dá)到峰，96h 后停止死亡，而對(duì)照組無(wú)發(fā)病和死亡現(xiàn)象。其中共 6 組，組 6 為腹腔射 300μL 未稀釋原菌液，通過(guò)活菌計(jì)數(shù)測(cè)得原菌液細(xì)菌濃度為 1×109cfu/mL，組 6 腹腔注射活菌數(shù)量為 3×108cfu，其他組依次 10 倍稀釋，組 7 為生理鹽水照組。具體死亡數(shù)量及時(shí)間（見表 1-7）。將結(jié)果輸入到半致死濃度自動(dòng)計(jì)算表格，根據(jù)寇氏法得出菌 AX002 對(duì)體長(zhǎng)-15cm，體重 30-50g 鯽魚半致死濃度（LD50）為 2.38×107cfu/mL。

Table 1-7 Results of infection test試驗(yàn)魚條數(shù) 24h 死亡條數(shù) 48h 死亡條數(shù) 72h 死亡條數(shù) 總計(jì)1 20 0 0 0 02 20 0 0 0 03 20 0 0 0 04 20 1 1 2 45 20 1 2 5 86 20 2 4 14 207 20 0 0 0 0組 1 細(xì)菌劑量為 3×103cfu、組 2 細(xì)菌劑量為 3×104cfu、組 3 細(xì)菌劑量為 3×105cfu、 3×106cfu、組 5 細(xì)菌劑量為 3×107cfu、組 6 細(xì)菌劑量為 3×108cfu、組 7 為生理鹽水菌的鑒定結(jié)果蘭氏染色結(jié)果色結(jié)果在油鏡鏡檢下，見紅色短桿狀細(xì)菌（圖 1-8），結(jié)果為革

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3548167