刺激隱核蟲是對海水魚養(yǎng)殖業(yè)危害最大的寄生蟲之一,能感染大多數(shù)海水魚品種,造成大量死亡。本研究從福建省長樂、寧德、福鼎三地分離得到寄生于牙鲆、大黃魚、石斑魚的三株刺激隱核蟲。通過ITS序列對這三株刺激隱核蟲進行分子生物學(xué)鑒定,并以ITS-1序列和HSP70基因序列為分子標(biāo)記對這三株刺激隱核蟲做序列和系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)這三株刺激隱核蟲的同源性很高。以褐牙鲆作為刺激隱核蟲的感染模式魚,在水溫22℃-24℃下,對刺激隱核蟲進行實驗室傳代,詳細觀察其生活史及各階段的形態(tài)結(jié)構(gòu),比較不同溫度處理過的包囊的孵化率和孵出幼蟲感染能力,分別采集感染2周后和4周后的褐牙鲆血清做抑動試驗。目前已成功進行了40個周期的傳代保種,每個周期為8d～10d,表明褐牙鲆可作為刺激隱核蟲的模式宿主魚,為刺激隱核蟲的研究提供穩(wěn)定材料來源。刺激隱核蟲滋養(yǎng)體存在于鰓片、體表和鰭條上,呈比針尖略大的白點狀,為圓形或橢圓形,移行過程形狀會改變,大小為100 μm-400μm,外覆一層纖毛,經(jīng)過瑞氏染色后觀察到滋養(yǎng)體內(nèi)4葉大核。包囊前體膜壁薄,為圓形或橢圓形,在海水中2h～8h緩慢游動后附著于底壁。包囊透光度明顯較包囊前體的低,大小... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＩＴＳ?ＰＣＲ產(chǎn)物電泳結(jié)果??Ｆｉｇ．２－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＩＴＳ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｉ＇ｅｓｉｓ?ｄｅｆｅｃｔｉｏｎ??

２．２．３?ＨＳＰ了０部分序列的ＰＣＲ擴増及測序分析結(jié)果??２．２．３．１?ＨＳＰ７０部分序列的ＰＣＲ擴増??ＰＣ民擴增產(chǎn)物于１?％的瓊脂糖凝膠電泳進行電泳，可見大小約５００ｂｐ（圖２－３），??與預(yù)期相符。陽性克隆菌ＰＣ民驗證再次得到約５００ｂｐ片段。??ｂｏ?Ｍ?１?２?３?４??２０００??５００??１００??圖２－３ＨＳＰ７０部分序列的ＰＣＲ產(chǎn)物的電泳??Ｆｉｇ．２＿３?ＰＣ艮?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｐａｒｔｉａｌ?ＨＳＰ７０?ｇｅｎｅ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??過?ｅｔ：ｅｃｔｉｏ?田??注：Ｍ?為?ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，?１－３?別為?ＣＬ］２０９、ＦＤ１２１０、ＮＤＩ３０４?株?ＰＣ民產(chǎn)物，４?為空白對照??２．２．３．２?ＨＳＰ７０基因部分序列分析??各�。祩�陽性克隆菌液由上海生工生物工程公司測序，蘭個蟲株的ＨＳＰ７０??部分序列大小均為４７８ｂｐ，編碼１５９個氨基酸。ＣＬ１２０９株基因序列與ＦＤ１２１０??株完全一致，與ＮＤ１３０４株的同源性為９９．３７％，存在Ｈ個堿基差異＂’（圖２－４），??分別位于距３＇端１７８ｂｐ處（Ｃ／Ｔ），距３’端２７０ｂｐ處（Ｇ／Ａ），距３＇端４３２ｂｐ處（Ｔ／Ｃ）。??而其編碼的氨基酸序列僅有２個位點的差異，即９０個氨基酸（Ｒ／Ｋ）和第１４４??個氨基酸（Ｖ／Ａ）。??將化１２０９的ＨＳＰ７０基因庫列

化ａ為感染魚的餓片Ｉ?１、２為滋養(yǎng)體；ｂ為低倍境下鮑絲內(nèi)的滋養(yǎng)體；ｃ為體表粘液中滋養(yǎng)體；ｄ為滋養(yǎng)??體的瑞氏染色。??滋養(yǎng)體發(fā)育成熟或受到外界刺激后脫離魚體，成為包囊前體（圖３－２－ａ），包??囊前體膜壁薄，大小與包囊相近，同Ｂｕｒｇｅｓｓ和Ｍａｔｔｈｅｗｓ＾描述的一致，包囊前??體經(jīng)過２?ｈ?￣?８?ｈ緩慢游動盾附著于底壁，在１０?ｈ內(nèi)膜壁增厚形成包囊。??光學(xué)顯微鏡下，包囊大多數(shù)為圓形或桐圓形，透光度明顯較包囊前體的低（圖??３－２－ｂ）。測量５５個包囊，其大小為３２８．５主３９．６叫１１ｘ４０１．２?±４７．４叫ｎ。２７?°Ｃ水??溫條件下，包囊在形成后２４ｈ￣４８ｈ原生質(zhì)開始出現(xiàn)不均等分裂，分裂出大細胞??和小細胞（圖３－２－Ｃ），最終分裂成為大小相近的圓形或楠圓形小幼體（圖３－２－ｄ），??然后發(fā)育成為幼蟲并在包囊內(nèi)快速游動，隨后鉆出包囊。在少數(shù)包囊內(nèi)，部分幼??蟲仍在游動卻未鉆出包囊（圖３－２－６－１）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大菱鲆刺激隱核蟲病的診治[J]. 宮春光,趙鳳嬌,何忠偉,孫桂清,趙振良.  科學(xué)養(yǎng)魚. 2013(10)
[2]閩東海域刺激隱核蟲的生活史觀察及乙酸殺蟲效果[J]. 鄔陽,牛素芳,金媛,毛勇,蘇永全.  廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(02)
[3]黃斑藍子魚皮膚黏液對刺激隱核蟲及一些病原菌的抑殺作用[J]. 黎睿君,劉芳,王方華,李安興.  水生生物學(xué)報. 2013(02)
[4]龍膽石斑刺激隱核蟲病防治技術(shù)研究[J]. 王大鵬,何安尤,謝達祥,李長伙,陳曉漢.  水產(chǎn)科技情報. 2013(01)
[5]福建海水養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)狀、存在問題與發(fā)展對策[J]. 寧岳,曾志南,蘇碰皮,鄭樂云,葉金聰.  福建水產(chǎn). 2011(03)
[6]養(yǎng)殖大菱鲆隱核蟲病及其治療[J]. 王印庚,劉志偉,林春媛,陳霞,王玲,李華.  水產(chǎn)學(xué)報. 2011(07)
[7]福建霞浦海區(qū)刺激隱核蟲蟲株鑒定及生活史觀察[J]. 孫志宇,鄭昌峰,武曉燕,郭果為,汪彥愔,黃曉紅.  福建師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2011(02)
[8]犬弓首蛔蟲ITS1基因的克隆及序列分析[J]. 周榮瓊,夏慶友,黃漢成,鄧夢竹.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2010(10)
[9]兩株水牛伊氏錐蟲內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)基因序列的測定與系統(tǒng)進化關(guān)系[J]. 石云良,李健,黃維義,張為宇,張居作,付強,張曉溪,黃文忠,何國聲.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2009(11)
[10]福建省主要養(yǎng)殖區(qū)海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚類刺激隱核蟲病的調(diào)查及防控對策[J]. 蘇躍中.  水產(chǎn)科技情報. 2009(01)

博士論文
[1]石斑魚TLRs功能及刺激隱核蟲感染后免疫相關(guān)基因表達分析[D]. 李言偉.中山大學(xué) 2012



本文編號：3508914