黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco Richardson）是中國(guó)的一種重要的養(yǎng)殖魚(yú)類,但它體型較小、生長(zhǎng)較慢,限制了黃顙魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。為獲得大規(guī)格且快速生長(zhǎng)的黃顙魚(yú),本論文開(kāi)展了黃顙魚(yú)轉(zhuǎn)基因和基因敲除的研究。首先,比較了精子載體法和顯微注射法將轉(zhuǎn)基因構(gòu)件導(dǎo)入黃顙魚(yú)受精卵的效率。其次,應(yīng)用顯微注射法將以黃顙魚(yú)β-actin基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)黃色熒光蛋白報(bào)告基因構(gòu)件導(dǎo)入黃顙魚(yú)受精卵,獲得了轉(zhuǎn)黃色熒光蛋白基因黃顙魚(yú)1尾,證明黃顙魚(yú)β-actin基因啟動(dòng)子可驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)。第三,通過(guò)將黃顙魚(yú)β-actin基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的“全魚(yú)”轉(zhuǎn)生長(zhǎng)激素基因構(gòu)件導(dǎo)入黃顙魚(yú)受精卵,獲得轉(zhuǎn)“全魚(yú)”生長(zhǎng)激素基因黃顙魚(yú)1尾。最后,為制作不育系黃顙魚(yú),運(yùn)用CRISPR-Cas9技術(shù)獲得gnrh1與gnrh2基因單或雙敲除的雜合子黃顙魚(yú)51尾。以上結(jié)果成功地建立了黃顙魚(yú)基因組改造的技術(shù)平臺(tái),為黃顙魚(yú)的基因工程育種奠定了基礎(chǔ)。1.比較了精子載體法和顯微注射法將轉(zhuǎn)基因構(gòu)件導(dǎo)入黃顙魚(yú)受精卵的效率。將含黃顙魚(yú)1017 bp β-actin基因5’-起始密碼子上游側(cè)翼序列的近端啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的黃色熒光蛋白報(bào)告... 

【文章來(lái)源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：107 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２．１?１７５６?ｂｐ黃顙魚(yú)ｐ－ａｃｔｉｎ基因片段示意圖

Ｉｄ?�。�？＊，．ｊ?＿?：？?：：—ｒ－１?＿?；〒：??ＭＣＡＡＩＵａＷ２￣？）?ＢＣＡｔｄｉｉｍＵ＾ｒ）?＾ＳｔＡＴＡｂ？（．？＊－２４）?＊?Ｉ＊ｉｔｙ？ｗ４ｅ〇Ｗｌ２＾ｌ〇??圖２．１?１７５６?ｂｐ黃顙魚(yú)ｐ－ａｃｔｉｎ基因片段示意圖。??預(yù)測(cè)翻譯起始位點(diǎn)標(biāo)記為＋１，外顯子標(biāo)記為矩形，內(nèi)含子標(biāo)記為實(shí)線。起始密碼子（ＡＴＧ）??標(biāo)記為“＊”，ＣＡＡＴ框，ＣＡｒＧ?ｍｏｔｉｆ，和ＴＡＴＡ框由不同豎的矩形表示，途中各數(shù)字表示堿??基對(duì)位置。??Ｆｉｇ．?２．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｙｅｌｌｏｗ?ｃａｔｆｉｓｈ?ｐ－ａｃｔｉｎ?ｇｅｎｏｍｉｃ??ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｗｉｔｈ?１，７５６?ｂｐ?ｌｏｎｇ．??Ｔｈｅ?ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｓｔａｒｔ?ｓｉｔｅ?ｉｓ?ｄｅｎｏｔｅｄ?＋１．?Ｅｘｏｎｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ｒｅｃｔａｎｇｌｅｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｒｏｎｓ?ａｒｅ??ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ｓｏｌｉｄ?ｌｉｎｅｓ．?Ｔｈｅ?ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ?ｃｏｄｏｎ?（ＡＴＧ）?ｉｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｂｙ?ａ?ｓｔａｒ．?Ｃｉｓ－ｅｌｅｍｅｎｔｓ?ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ??ＣＡＡＴ?ｂｏｘ

精卵數(shù)量約３０００枚。其中的一次共獲得發(fā)育至受精后２４小時(shí)以上的胚胎６７０??枚，對(duì)受精后２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的胚胎在熒光顯微鏡下進(jìn)行了觀察，可觀測(cè)到表??達(dá)熒光蛋白的胚胎共４５１枚，具全身廣泛性表達(dá)的有７７枚，結(jié)果見(jiàn)圖２．３。結(jié)果??表明顯微注射法可以有效將Ｔｇ?轉(zhuǎn)入黃顙魚(yú)胚胎并有效表達(dá)。??以上結(jié)果顯示，精子載體法雖然具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，但是其轉(zhuǎn)移效率太低，??在約８０００枚受精卵中均未見(jiàn)到黃色焚光蛋白的表達(dá)；而顯微注射法獲得表達(dá)熒??光蛋白的黃顙魚(yú)胚胎共４５１枚，具全身廣泛性表達(dá)黃顙魚(yú)胚胎７７枚。由此可見(jiàn)，??顯微注射技術(shù)可作為有效的轉(zhuǎn)基因方法應(yīng)用于黃顙魚(yú)轉(zhuǎn)基因制作。??２４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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