發(fā)布時間：2021-11-15 13:05

　　鰻弧菌感染鰻鱺、鱸魚、黃魚、鮭魚、香魚、大菱鲆、牙鲆、虹鱒、對蝦等廣大水產養(yǎng)殖生物,具有發(fā)病快,致死率高和流行廣泛特點,給水產養(yǎng)殖業(yè)造成較大的危害,受到廣泛關注,成為研究熱點。制備鰻弧菌（SMW5）全菌滅活抗原,免疫新西蘭兔,制備兔抗多克隆抗體血清,其效價達1:320000;對鰻弧菌檢測靈敏度為1×104CFU/mL;與副溶血弧菌（ATC17802）、嗜水氣單胞菌（JS01-1）和類志賀鄰單胞菌（LCCi190625）有微弱的交叉反應;Western-Blot表明多克隆抗體與抗原的40 kDa蛋白有結合,與25-35 kDa的蛋白也有抗原抗體反應。所制備的3株單克隆抗體,其中1H9效價好、抗體分泌穩(wěn)定、靈敏度高、特異性強,可應用于鰻弧菌ELISA或金標試紙條的研制。以滅活鰻弧菌（SMW5）全菌為抗原,免疫Balb/c小鼠,應用雜交瘤細胞融合技術,制備鰻弧菌單克隆抗體:細胞融合率達94.6%,融合陽性率達到62.4%;篩選得到3株單克隆抗體分別命名為1H9、1C12、6F8,陽性細胞株培養(yǎng)上清的效價分別為 1:6400、1:3200、1:800,細胞亞類分別為 IgG2a、IgM、IgG... 

【文章來源】：福建農林大學福建省

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１鰻弧菌形態(tài)??．．ｒｍｒｏ?ａｎｕａｒｕｍ??

圖１．２質粒ｐＪＭｌ??Ｆｉｇ．１．２?Ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｏｆ?ｐＪＭＩ??１型鰻弧菌不含質粒，但毒性很強，其鐵吸收系茶酚胺鐵載體和兩種１ＲＯＭＰ。此種鐵載體與鰻表現，缺乏同源性。與大腸桿菌素作用相似。者［３３，３４］不排除這兩者之間存在進化關系，但更產物（ＥＣＰ）具有溶血活性。溶血素為單一的動物致死性。鰻弧菌的溶血素可使鰻鱺致死，低于ＫＴＣ時溶解活性下降，最適作用溫度為２０血紅白為細菌提營養(yǎng)需要。??

３．３多克隆抗體的純化??將制備的鰻弧菌（ＳＭＴ５）多克隆抗體采用飽和硫酸銨溶液純化法純化。結??果如圖２．１所示。在１０？１５?ｋＤａ和４４？５５?ｋＤａ出現明顯的條帶。??Ｉ純化前?２純化后．?３ＰＭ??一?????－一Ｓ??；?！??圖２．１鰻弧菌０Ｓ７ＷＴＦ５）多克隆抗體的純化與ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳??Ｆｉｇ．２，１?Ｔｈｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＡｂ?ｏｆ?Ｖ．ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ?（ＳＭＷ５）??３．４多克隆抗體的效價檢測??３「ｉａｊ??２５．１??＼＼?■－多抗效價??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]鰻弧菌多克隆抗體的制備及其特性分析[J]. 王雪妹,吳斌,黃小紅,樊海平.  科學養(yǎng)魚. 2015(01)
[2]5株鲆鰈魚類病原菌多克隆抗體的制備與應用[J]. 朱巖松,王秀華,韓雯,王銳,黃倢.  漁業(yè)科學進展. 2013(03)
[3]遲緩愛德華氏菌膠體金快速檢測試紙的研制[J]. 辛志明.  中國海洋大學學報(自然科學版). 2011(10)
[4]應用間接熒光抗體技術檢測林蛙嗜水氣單胞菌[J]. 白雪梅,李太元,楊興,李艷茹,孫丹丹,董丹.  水產科學. 2010(10)
[5]抗鯰愛德華氏菌多克隆抗體的制備及特性分析[J]. 李華,李重實,李明,李強,葉仕根.  中國海洋大學學報(自然科學版). 2010(10)
[6]鰻弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物學研究現狀（下）[J]. 孟思妤,孟長明,陳昌福.  漁業(yè)致富指南. 2010(02)
[7]鰻弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物學研究現狀（上）[J]. 孟思妤,孟長明,陳昌福.  漁業(yè)致富指南. 2010(01)
[8]遲緩愛德華氏菌間接ELISA快速檢測法[J]. 白方方,蘭建新,王燕,韓茵,張曉華.  中國水產科學. 2009(04)
[9]利用PCR技術快速檢測水產品中副溶血性弧菌[J]. 王豪,孫曉紅.  安徽農業(yè)科學. 2009(15)
[10]雙抗原夾心ELISA檢測抗鰻弧菌抗體效價的研究[J]. 邊慧慧,蔣繼志,黃倢,李珊珊,王秀華.  科技信息. 2009(07)

博士論文
[1]鰻弧菌主要致病因子的研究[D]. 陳師勇.中國科學院研究生院（海洋研究所） 2003

碩士論文
[1]抗哈維弧菌單克隆抗體的制備、特性分析與應用[D]. 李洋.大連海洋大學 2014
[2]魚類病毒性出血性敗血癥病毒單克隆抗體的制備及其核蛋白基因的原核表達[D]. 杜娟.華中農業(yè)大學 2012
[3]創(chuàng)傷弧菌膠體金免疫層析試紙條研制[D]. 嚴智敏.南方醫(yī)科大學 2011
[4]副溶血性弧菌特異性抗體的制備研究[D]. 翁仕強.上海海洋大學 2011
[5]副溶血弧菌耐熱溶血毒素單克隆抗體的研究[D]. 張建.上海海洋大學 2011
[6]海水養(yǎng)殖魚類主要細菌病多聯疫苗的研制及應用[D]. 劉斌.中國海洋大學 2007
[7]歐洲鰻鱺敗血癥病理學和組織化學的研究[D]. 卓玉琛.福建農林大學 2007



本文編號：3496836