大鯢（Andrias davidianus）屬兩棲綱有尾目隱鰓鯢科,為國家二級保護動物,是兩棲綱動物的最大物種,也是動物進化的“活化石”。大鯢屬肉食性動物,食性主要為蛋白類食物。大鯢的生長發(fā)育及攝食種類受季節(jié)性影響較大,大鯢是兩棲綱與爬行綱的過渡類群,其消化道結構復雜,腸道微生物組成多樣。研究大鯢腸道微生物多樣性及產酶活性不僅可以給野生大鯢保護提供依據(jù),也可以為大鯢人工化養(yǎng)殖預防病害提供依據(jù)。本論文研究以野生大鯢與養(yǎng)殖大鯢兩種樣品為實驗材料,通過微生物純培養(yǎng)技術與免培養(yǎng)技術全面的分析兩類生境下的大鯢腸道微生物的組成與群落多樣性分析;通過微生物胞外酶研究方法對兩種樣品進行腸道細菌產胞外酶篩選。野生大鯢腸道微生物多樣性及產酶活性分析采用純培養(yǎng)技術分離野生大鯢腸道細菌,選用引物27F/1492R擴增后進行分子生物學鑒定。結果表明,野生大鯢分離到的86株腸道細菌可劃分為2個門6個屬,變形菌門（Proteobacteria,80.23%）:羅維登斯菌屬,愛德華氏菌屬,檸檬酸桿菌屬;厚壁菌門（Firmicutes,19.77%）:漫游球菌屬,芽孢桿菌屬,賴氨酸芽孢菌屬。應用胞外酶培養(yǎng)基篩選野生大鯢... 

【文章來源】：陜西理工大學陜西省

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 大鯢
    1.2 大鯢研究現(xiàn)狀
    1.3 腸道微生物研究現(xiàn)狀
    1.4 腸道細菌
    1.5 古菌研究
    1.6 微生物胞外酶
    1.7 純培養(yǎng)技術
    1.8 免培養(yǎng)技術
第2章 野生大鯢腸道細菌多樣性及產酶活性分析
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 野生大鯢腸道細菌純培養(yǎng)多樣性
            2.2.1.1 腸道細菌分離培養(yǎng)
            2.2.1.2 腸道細菌 16S rRNA擴增
            2.2.1.3 腸道細菌 16S rRNA分子鑒定
        2.2.2 野生大鯢腸道細菌純培養(yǎng)產酶活性
        2.2.3 野生大鯢腸道細菌免培養(yǎng)多樣性
            2.2.3.1 腸道細菌總DNA提取
            2.2.3.2 腸道細菌總DNA的 16S rRNA擴增
            2.2.3.3 大腸桿菌感受態(tài)DH5α 細胞制備及轉化
            2.2.3.4 陽性克隆子篩選及鑒定
        2.2.4 野生大鯢腸道古菌免培養(yǎng)多樣性
            2.2.4.1 腸道古菌總DNA提取
            2.2.4.2 腸道古菌總DNA的 16S rRNA擴增
            2.2.4.3 陽性克隆子篩選及鑒定
    2.3 結果和分析
        2.3.1 野生大鯢腸道細菌純培養(yǎng)多樣性結果
            2.3.1.1 腸道細菌分離結果
            2.3.1.2 腸道細菌 16S rRNA擴增結果
            2.3.1.3 腸道細菌 16S rRNA測序結果及系統(tǒng)發(fā)育構建
        2.3.2 野生大鯢腸道細菌純培養(yǎng)產酶活性結果
        2.3.3 野生大鯢腸道細菌免培養(yǎng)多樣性結果
            2.3.3.1 腸道細菌總DNA提取結果
            2.3.3.2 腸道細菌總DNA的 16S rRNA擴增結果
            2.3.3.3 大腸桿菌感受態(tài)DH5α 轉化結果
            2.3.3.4 陽性克隆鑒定結果及系統(tǒng)發(fā)育構建
        2.3.4 野生大鯢腸道古菌免培養(yǎng)多樣性結果
            2.3.4.1 腸道古菌總DNA提取結果
            2.3.4.2 腸道古菌總DNA的 16S rRNA擴增結果
            2.3.4.3 陽性克隆鑒定結果及系統(tǒng)發(fā)育構建
    2.4 小結與討論
第3章 人工養(yǎng)殖大鯢腸道細菌多樣性及產酶活性分析
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 養(yǎng)殖大鯢腸道細菌純培養(yǎng)多樣性
            3.2.1.1 腸道細菌分離培養(yǎng)
            3.2.1.2 腸道細菌 16S rRNA擴增
            3.2.1.3 腸道細菌 16S rRNA分子鑒定
        3.2.2 養(yǎng)殖大鯢腸道細菌純培養(yǎng)產酶活性
        3.2.3 養(yǎng)殖大鯢腸道細菌免培養(yǎng)多樣性
            3.2.3.1 腸道細菌總DNA提取
            3.2.3.2 腸道細菌總DNA的 16S rRNA擴增
            3.2.3.3 大腸桿菌感受態(tài)細胞轉化
            3.2.3.4 陽性克隆子篩選及鑒定
    3.3 結果與分析
        3.3.1 養(yǎng)殖大鯢腸道細菌純培養(yǎng)多樣性結果
            3.3.1.1 腸道細菌分離培養(yǎng)結果
            3.3.1.2 腸道細菌 16S rRNA擴增結果
            3.3.1.3 腸道細菌 16S rRNA測序結果及系統(tǒng)發(fā)育構建
        3.3.2 養(yǎng)殖大鯢腸道細菌純培養(yǎng)產酶活性結果
        3.3.3 養(yǎng)殖大鯢腸道細菌免培養(yǎng)多樣性結果
            3.3.3.1 腸道細菌總DNA提取結果
            3.3.3.2 大腸桿菌感受態(tài)DH5α 轉化結果
            3.3.3.3 腸道細菌總DNA的 16S rRNA擴增結果
            3.3.3.4 陽性克隆鑒定結果及系統(tǒng)發(fā)育構建
    3.4 小結與討論
總結與討論
參考文獻
攻讀碩士學位期間學術成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]木霉內切葡聚糖酶的研究現(xiàn)狀及應用[J]. 李青青,黃曉梅,范金霞,陳秀玲,孫旭東,李東玉.  基因組學與應用生物學. 2015(10)
[2]微生物非培養(yǎng)技術在環(huán)境微生物領域的研究進展[J]. 梅冰,陸翔,王永喬,王靜,張瑞,李顯秋.  化學工程師. 2015(10)
[3]產蛋白酶嗜熱菌Anoxybacillus sp.紫外誘變研究[J]. 應長青,洪心,李旭穎,鄭宸,尹凡碩,謝輝,韓松,秦博.  哈爾濱醫(yī)科大學學報. 2015(05)
[4]嗜熱鏈球菌關鍵生產特性分子水平的研究進展[J]. 趙春雨,崔艷華,曲曉軍,俞婷,張春玲.  中國乳品工業(yè). 2015(10)
[5]脂肪酶的制備及其在皮革工業(yè)中的應用[J]. 周秀軍,周利芳,周建民,隋喜龍.  西部皮革. 2015(20)
[6]“掛壁”法篩選常溫稻稈腐解菌及其降解能力研究[J]. 韋中,徐春淼,鄭海平,廖漢鵬,王世梅,沈其榮,徐陽春.  農業(yè)環(huán)境科學學報. 2015(10)
[7]紅鰭東方鲀稚魚腸道可培養(yǎng)細菌的多樣性[J]. 李艷宇,任盟,張叢堯,王連順,朱瑩,馬悅欣.  水產科學. 2015(10)
[8]蠟質芽孢桿菌AT31防治根結線蟲的應用技術探討[J]. 劉元兵,舒暢,高揚,夏長松,閆俊會,張雪雪.  農藥科學與管理. 2015(10)
[9]基于16S rRNA基因序列分析家蠶腸道細菌的多樣性[J]. 許剛,孫振麗,胡小龍,薛仁宇,曹廣力,貢成良.  蠶業(yè)科學. 2015(04)
[10]產蛋白酶酵母菌的選育及酶學特性[J]. 徐亞男,史學偉,童軍茂,談思維,安洋洋,肖婧.  現(xiàn)代食品科技. 2015(10)

博士論文
[1]揚州鵝腸道微生物多樣性及其受飼糧纖維水平的調控研究[D]. 劉蓓一.揚州大學 2012

碩士論文
[1]內蒙古錫林郭勒牧區(qū)健康家畜腸道菌群多樣性研究[D]. 白娜.內蒙古農業(yè)大學 2014
[2]小菜蛾腸道菌群對宿主生長發(fā)育的影響[D]. 林美玲.福建農林大學 2014
[3]中國大鯢Sox2和Sox19基因cDNA全長克隆及其組織表達分析[D]. 何青.四川農業(yè)大學 2013
[4]南美白對蝦專用益生菌研究[D]. 郝凱.西北農林科技大學 2013
[5]太湖養(yǎng)殖中華絨螯蟹腸道菌群多樣性研究[D]. 狄盼盼.上海海洋大學 2013
[6]雪豹腸道菌群多樣性研究[D]. 劉廣帥.曲阜師范大學 2013
[7]飼喂不同纖維分解菌對鵝腸道菌群多樣性的影響[D]. 馬鳳蓮.吉林農業(yè)大學 2012
[8]羊胚胎胃腸道細菌分離與鑒定[D]. 于超.吉林農業(yè)大學 2012
[9]陜西省太白縣大鯢資源調查及其變動情況分析[D]. 王啟軍.西北農林科技大學 2012
[10]幾種常用實驗動物與人腸道主要菌群多樣性比較[D]. 李偉.西南大學 2011



本文編號：3494917