本論文以我國重要的海水養(yǎng)殖貝類長牡蠣（Crassostrea gigas；又稱太平洋牡蠣）為研究對象，克隆了一個長牡蠣酪氨酸酶基因，分析了其組織表達(dá)特性以及進化地位，并開展了長牡蠣基因家族的分類、系統(tǒng)進化研究。本文的研究內(nèi)容和主要研究結(jié)果如下：1長牡蠣酪氨酸酶基因CgTyr2的克隆及其特性分析以長牡蠣成貝為實驗材料，利用長牡蠣基因組數(shù)據(jù)庫，設(shè)計引物，得到中心片段后，經(jīng)過3’RACE和5’RACE，從長牡蠣外套膜中擴增出酪氨酸酶CgTyr2全長基因。長牡蠣酪氨酸酶基因CgTyr2的cDNA全長為2563bp，開放閱讀框2100bp。編碼299個蛋白質(zhì)，分子量為77.4KDa，理論等電點為-3.3。BLAST分析表明，長牡蠣酪氨酸序列與已知貝類的酪氨酸酶基因具有較高的同源性。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，血藍(lán)蛋白是由原始的酪氨酸酶基因復(fù)制并伴隨功能分化形成的。長牡蠣以及其他軟體動物的酪氨酸酶基因家族的形成可能是由酪氨酸酶在軟體動物分化形成前后復(fù)制得到。熒光定量PCR分析顯示，長牡蠣酪氨酸酶基因CgTyr2在各個組織中都有表達(dá)，其中外套膜外層表達(dá)量最高，可能與長牡蠣角質(zhì)層的形成以及貝殼著色有關(guān)。2長牡蠣... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 酪氨酸酶概述
        1.1 酪氨酸酶的分布
        1.2 酪氨酸酶的理化性質(zhì)和活性中心
        1.3 酪氨酸酶的生理作用
        1.4 酪氨酸酶催化生成黑色素的反應(yīng)過程
        1.5 酪氨酸酶的應(yīng)用和發(fā)展方向
            1.5.1 在環(huán)境保護方面的應(yīng)用
            1.5.2 酪氨酸酶在美容保健和醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.3 在食品加工與儲藏方面的應(yīng)用
            1.5.4 在制備生物傳感器方面的應(yīng)用
            1.5.5 在有機合成方面的應(yīng)用
    2 分子系統(tǒng)發(fā)生分析及在酪氨酸酶進化分析中的應(yīng)用
        2.1 分子系統(tǒng)學(xué)的研究意義及發(fā)展簡史
            2.1.1 分子系統(tǒng)學(xué)及相關(guān)概念
            2.1.2 分子系統(tǒng)學(xué)的研究意義
            2.1.3 分子系統(tǒng)學(xué)的發(fā)展簡史
            2.1.4 分子系統(tǒng)學(xué)的研究方法
        2.2 分子系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建過程
        2.3 分子系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建方法
        2.4 酪氨酸酶基因家族的分類及系統(tǒng)發(fā)生分析
            2.4.1 酪氨酸酶的分類
            2.4.2 酪氨酸酶基因家族的系統(tǒng)發(fā)生分析
    3 貝類殼色遺傳育種
        3.1 雙殼貝類概述及經(jīng)濟價值
        3.2 貝類殼色遺傳育種
    4 本研究目的
第二章 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 的全長克隆、表達(dá)及序列分析
    1 引言
    2 實驗材料與方法
        2.1 實驗所用引物
        2.2 主要化學(xué)試劑及試劑配置
            2.2.1 試劑來源
            2.2.2 主要試劑的配置
        2.3 實驗動物
        2.4 實驗前操作
        2.5 長牡蠣各組織的分離
        2.6 長牡蠣總 RNA 的提取過程
        2.7 第一鏈 cDNA 的合成及檢測
            2.7.1 第一鏈 cDNA 的合成
            2.7.2 反轉(zhuǎn)錄檢測
        2.8 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 核心片段的獲得
        2.9 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr23’ RACE
        2.10 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr25’ RACE
        2.11 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 的結(jié)構(gòu)和特性分析
        2.12 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 進化樹構(gòu)建
        2.13 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 的組織特異性表達(dá)
            2.13.1 不同組織 cDNA 的獲得
            2.13.2 定量 RT-PCR
    3 實驗結(jié)果分析與討論
        3.1 長牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 cDNA 序列分析
        3.2 酪氨酸酶序列系統(tǒng)進化樹分析
        3.3 酪氨酸酶基因在長牡蠣不同組織中的定量分析
第三章 長牡蠣部分酪氨酸酶基因家族中心片段的克隆
    1 材料與方法
        1.1 實驗所用引物
        1.2 長牡蠣酪氨酸酶基因 14TYR，16TYR，75TYR，26TYR 核心片段獲得
    2 結(jié)果與討論
第四章 長牡蠣酪氨酸酶基因家族的分類和系統(tǒng)發(fā)生分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 酪氨酸酶氨基酸序列的獲得
        2.2 長牡蠣酪氨酸酶基因家族結(jié)構(gòu)分析
        2.3 長牡蠣酪氨酸酶基因家族氨基酸序列分析
        2.4 長牡蠣酪氨酸酶基因家族進化分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 長牡蠣酪氨酸酶基因家族所在 Scaffold 分析
        3.2 長牡蠣酪氨酸酶基因家族的分類與保守區(qū)域分析
        3.3 長牡蠣酪氨酸酶基因家族的進化分析
    4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
碩士期間學(xué)術(shù)成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]海鮮之珍品——牡蠣[J]. 歐陽軍.  養(yǎng)生月刊. 2012(10)
[2]軟體動物和甲殼動物酚氧化酶的研究進展[J]. 吳曙,王淑紅,王藝?yán)?張子平.  動物學(xué)雜志. 2009(05)
[3]植物多酚氧化酶研究綜述[J]. 代麗,宮長榮,史霖,陳付軍,鞏培智.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2007(06)
[4]酪氨酸酶的研究進展[J]. 陳清西,宋康康.  廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2006(05)
[5]中華絨螯蟹酚氧化酶的初步研究[J]. 馬貴華,鐘青,曹義虎,陳道印,劉六英.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2006(01)
[6]菲律賓蛤仔莆田群體兩個殼色品系生長發(fā)育的比較[J]. 閆喜武,張國范,楊鳳,梁峻.  大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報. 2005(04)
[7]酪氨酸酶的應(yīng)用研究進展[J]. 歐志敏,王普,王鴻,柳彩波.  中國生物工程雜志. 2005(S1)
[8]植物多酚氧化酶及其活性特征的研究進展[J]. 趙伶俐,范崇輝,葛紅,劉洪濤.  西北林學(xué)院學(xué)報. 2005(03)
[9]植物多酚氧化酶的研究進展[J]. 王曼玲,胡中立,周明全,宋運淳.  植物學(xué)通報. 2005(02)
[10]酪氨酸酶的應(yīng)用研究進展[J]. 張廷紅,葛長海,萬海清.  沿海企業(yè)與科技. 2005(02)

博士論文
[1]鰍超科魚類分子系統(tǒng)發(fā)育研究[D]. 唐瓊英.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]中國沿海頭足類DNA條形碼與分子系統(tǒng)發(fā)育研究[D]. 代麗娜.中國海洋大學(xué) 2012
[2]中國蛤蜊群體遺傳結(jié)構(gòu)與蛤蜊科貝類系統(tǒng)發(fā)育研究[D]. 倪樂海.中國海洋大學(xué) 2011
[3]香樟果實酪氨酸酶的分離、純化和性質(zhì)分析[D]. 張曉晴.江南大學(xué) 2008
[4]蓖麻蠶和天蠶線粒體DNA部分序列的測定和系統(tǒng)發(fā)生研究[D]. 劉玲玲.西南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3476635