細(xì)菌及病毒等病原體的入侵為動物維持正常生理功能帶來重大威脅。無脊椎動物不像脊椎動物那樣進(jìn)化出了一套復(fù)雜而完備的自我防御系統(tǒng),而是主要通過先天免疫來抵御病原體侵害�？咕模╝ntimicrobial peptide, AMP）是先天免疫過程中殺滅及清除病原體的重要作用因子。對蝦素（Penaeidin）作為特異性存在于對蝦體內(nèi)一類抗菌肽,不僅能夠直接殺滅細(xì)菌或抑制其生長繁殖,還可以作為一種調(diào)理因子在先天免疫中間接發(fā)揮作用。對蝦素是對蝦體內(nèi)抗菌肽家族的重要成員。迄今為止,已有五種類型的對蝦素被鑒定,它們均由一個(gè)N端的脯氨酸富集區(qū)和一個(gè)C端的半胱氨酸富集區(qū)組成,其半胱氨酸富集區(qū)含有的六個(gè)半胱氨酸形成三個(gè)二硫鍵。在本研究中,在日本囊對蝦體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種新型對蝦素,其全長序列除了含有一個(gè)脯氨酸富集區(qū)和一個(gè)半胱氨酸富集區(qū)（稱為對蝦素結(jié)構(gòu)域）外,其N-端還具有一個(gè)獨(dú)特的絲氨酸富集區(qū)。由此,我們將全部對蝦素分為兩個(gè)亞家族,所有已報(bào)道的對蝦素被命名為Ⅰ型亞家族（Pen-Ⅰ）,只具有1個(gè)對蝦素結(jié)構(gòu)域,包括5種對蝦素類型；而我們發(fā)現(xiàn)的這種新型對蝦素則被命名為對蝦素亞家族Ⅱ（Pen-Ⅱ）,含有絲氨酸富集區(qū)結(jié)構(gòu)域和... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
Abstract
符號說明
第一章 無脊椎動物先天免疫綜述
    一、無脊椎動物先天免疫概述
        1. 細(xì)胞免疫
            1.1 吞噬作用
            1.2 包囊作用
            1.3 結(jié)節(jié)化作用
        2. 體液免疫
            2.1 抗菌肽
            2.2 凝集素
            2.3 溶血素
            2.4 超氧化物歧化酶
            2.5 溶菌酶
            2.6 血藍(lán)蛋白
            2.7 酚氧化酶以及酚氧化酶原激活系統(tǒng)
        3. 模式識別受體
    二、對蝦素研究進(jìn)展
        1. 對蝦素的結(jié)構(gòu)
        2. 對蝦素的多樣性
        3. 對蝦素的功能
            3.1 抗真菌活性
            3.2 抗細(xì)菌活性
            3.3 細(xì)胞因子
第二章 一種新型對蝦素亞家族在日本對蝦先天免疫中的功能研究
    一、前言
    二、材料與方法
        1. 材料、試劑與儀器
            1.1 生物材料及載體
            1.2 試劑及儀器
        2. 方法
            2.1 日本囊對蝦的免疫刺激、組織RNA及蛋白提取
            2.2 cDNA合成
            2.3 反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)及實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)
            2.4 MjPen-Ⅱ的重組表達(dá)、蛋白純化及抗體制備
            2.5 核酸及氨基酸序列的生物信息學(xué)分析
            2.6 SDS-PAGE
            2.7 Western Blot
            2.8 液體抑菌實(shí)驗(yàn)
            2.9 細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
            2.10 多糖結(jié)合實(shí)驗(yàn)
            2.11 細(xì)菌凝集實(shí)驗(yàn)
            2.12 RNA干擾實(shí)驗(yàn)
            2.13 體內(nèi)細(xì)菌清除實(shí)驗(yàn)
            2.14 吞噬實(shí)驗(yàn)
    三、結(jié)果
        1. MjPen-Ⅱ全長cDNA克隆及序列比對
        2. MjPen-Ⅱ的組織分布以及病原刺激后的表達(dá)模式
        3. MjPen-Ⅱ的重組表達(dá)及抗體制備
        4. MjPen-Ⅱ的抑菌活性檢測
        5. MjPen-Ⅱ的細(xì)菌凝集活性檢測
        6. MjPen-Ⅱ的細(xì)菌結(jié)合活性及多糖結(jié)合活性
        7. MjPen-Ⅱ的細(xì)菌清除實(shí)驗(yàn)
        8. MjPen-Ⅱ?qū)ν淌勺饔玫挠绊?br>        9. MjPen-Ⅱ?qū)ν淌上嚓P(guān)基因表達(dá)水平的影響
    四、討論
創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hemolymph proteins in marine crustaceans[J]. W Sylvester Fredrick,S Ravichandran.  Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2012(06)



本文編號：3407477