牙鲆（Paralichthys olivaceus）中已有不少關(guān)于性腺發(fā)育和分化相關(guān)基因的鑒定和功能分析報道,但此類基因的挖掘多集中于這些編碼基因的表達(dá)規(guī)律和功能分析,對其轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控尤其是microRNA（mi RNA）的研究鮮有報道。本實驗室先前已建立了牙鲆精卵巢miRNA文庫,并通過第二代測序（NGS）技術(shù)和生物信息學(xué)方法鑒定了141個成熟miRNA,篩選出一批在牙鲆雌雄性腺中差異或特異表達(dá)的miRNA。在此基礎(chǔ)上,本研究挑選了1個表達(dá)量較高且在精卵巢中顯著差異表達(dá)的mi RNA-200b,進(jìn)一步采用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法和原位雜交技術(shù)分析了pol-miR-200b在牙鲆性腺中的表達(dá),并克隆和鑒定了其中和生殖相關(guān)的dazl和wt1a基因,并利用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法分析了溫度、外源性激素對pol-miR-200b、dazl和wt1a基因表達(dá)的影響。該研究對進(jìn)一步闡述miRNA-靶基因在牙鲆性腺分化和發(fā)育中的作用提供了理論基礎(chǔ)。首先,提取牙鲆成魚精卵巢總RNA,并采用RT-qPCR法檢測了miRNA-200b在牙鲆精卵巢中的表達(dá)情況,結(jié)果表明:po... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖0-1microRNA的發(fā)生過程

封片。。量檢測測 RNA，28S 條帶的亮度約為 18S 條帶亮度的兩有或顏色較暗，證明 RNA 質(zhì)量良好；用 NANOD，測得樣品值在 1.8-2.0 之間，證明提取 RNA 純度iR-200b 在不同組織中的定量表達(dá)過實時熒光定量 PCR 法檢測了牙鲆 pol-miR-200b 況（圖 1-1）。由圖中可看出 pol-miR-200b 基因在高，約為精巢的 6 倍。

27圖 1-2 牙鲆 pol-miR-200b 基因在牙鲆成魚各組織中的定位表達(dá)Fig 1-2 Localization and expression of pol-miR-200b gene in adult fish of Japanese flounder4 討論本實驗中，通過設(shè)計頸環(huán)引物運用實時熒光定量 PCR 法檢測發(fā)現(xiàn)：在牙鲆精卵巢中 pol-miR-200b 表達(dá)有差異，且卵巢表達(dá)量顯著高于精巢。這種情況表明它在牙鲆性腺發(fā)育和分化過程中可能扮演著重要的角色。miR-200b 通過 Ascl2調(diào)控胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生[89]，它參與胚胎干細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等生物功能[90]。此外，本實驗室前期已通過高通量測序并根據(jù)測序讀數(shù)的豐度得出


本文編號：3337504