益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用備受關(guān)注,人們在研究益生菌的有益作用的時候,也逐步意識到在應(yīng)用過程中可能存在安全隱患。因為益生菌在生長和繁殖過程中會產(chǎn)生一系列代謝產(chǎn)物并且部分代謝產(chǎn)物具有抗菌作用,這部分代謝產(chǎn)物的抗菌成分、特征和功能并不明確,這類益生菌在養(yǎng)殖生產(chǎn)中大量使用是否對養(yǎng)殖水體菌群產(chǎn)生不良影響,是否會對引入地區(qū)造成生物入侵,也知之甚少。芽孢桿菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖上應(yīng)用最廣泛的益生菌之一,本實驗室前期分離到一株對嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）具有良好抑制作用的解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）HE,為了探究解淀粉芽孢桿菌對致病性嗜水氣單胞菌的抑菌成分以及在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的安全性,本文開展了以下研究。為明確解淀粉芽孢桿菌HE發(fā)酵液中活性成分,測定了解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液的理化性質(zhì),PCR檢測了脂肽合成相關(guān)基因,四對引物的擴增產(chǎn)物經(jīng)過克隆、測序和BLAST分析,以及UPLC-Q-TOF-MS進一步分析其活性物質(zhì)成分。結(jié)果表明,該菌株發(fā)酵液具有表面活性且能夠抑菌,對高溫、酸、堿和蛋白酶具有一定的耐受性;解淀粉芽孢桿菌HE基因組含有ituA、f... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

脂肽類物質(zhì)相關(guān)基因的PCR檢測

2 結(jié)果與分析2.1 抑菌活性檢測結(jié)果解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液脂肽提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌效果見圖3.1。抑菌圈的直徑可達24.5±2.5mm，有較高重復(fù)性。圖3.1 脂肽提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌效果Fig. 3.1 Antibacterial effect of Lipopeptides extract on Aeromonas hydrophila2.2 抗菌粗提物的全波長掃描將甲醇溶解脂肽粗提物在190-330nm進行紫外全波長掃描，由圖3.2可知，該混合物在206nm和225nm處有兩個吸收峰，在206nm處吸收峰更強，所以選擇206nm為檢測波長。圖3.2 HE菌株粗提物的全波長掃描圖譜Fig.3.2 UV absorption spectrum of the crude antibacterial extract from HE

達24.5±2.5mm，有較高重復(fù)性。圖3.1 脂肽提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌效果Fig. 3.1 Antibacterial effect of Lipopeptides extract on Aeromonas hydrophila粗提物的全波長掃描溶解脂肽粗提物在190-330nm進行紫外全波長掃描，由圖3.2m和225nm處有兩個吸收峰，在206nm處吸收峰更強，所以選

【參考文獻】：
期刊論文
[1]超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時間質(zhì)譜法定性定量檢測硫化膠中促進劑DPG[J]. 溫劭,張清智,吳愛芹.  橡膠工業(yè). 2019(02)
[2]超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜快速篩查與確證生鮮牛乳中80種抗生素和激素[J]. 貢松松,張婧,嚴鳳,吳劍平,潘娟,顧欣.  分析測試學(xué)報. 2019(01)
[3]超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法測定克氏螯蝦中39種獸藥殘留[J]. 宋偉,趙暮雨,韓芳,呂亞寧,丁磊,周典兵,鄧曉軍,胡艷云,鄭平,盛旋.  色譜. 2018(12)
[4]枯草芽孢桿菌對草魚生長性能、腸道消化酶及抗氧化酶活性的影響[J]. 鞠守勇,李金山.  淡水漁業(yè). 2018(05)
[5]斑點叉尾“腹水癥”病原的分離鑒定及體外芽孢桿菌拮抗試驗[J]. 王亞軍,魏文娟,潘厚軍,顏曦,王芳,石存斌.  淡水漁業(yè). 2018(03)
[6]解淀粉芽孢桿菌SSY1株的安全性試驗[J]. 王巖,陳楠楠,侯美如,尹珺伊,劉宇,周慶民,秦平偉,史同瑞.  中國畜牧獸醫(yī). 2017(03)
[7]生防菌解淀粉芽孢桿菌KL-1的生物安全性檢測[J]. 吳雨龍,賁愛玲,江海濤,楊齊,高晨陽.  南京曉莊學(xué)院學(xué)報. 2016(06)
[8]水質(zhì)凈化乳酸菌的分離鑒定及發(fā)酵參數(shù)優(yōu)化[J]. 謝鳳行,張峰峰,周可,趙玉潔,趙瓊,孫海波.  微生物學(xué)報. 2017(02)
[9]枯草芽孢桿菌B2的生長及其對仿刺參的益生特性[J]. 張德強,關(guān)曉燕.  水產(chǎn)科學(xué). 2016(03)
[10]飼料中添加兩株乳酸菌及其發(fā)酵上清液對凡納濱對蝦消化酶活性的影響[J]. 沙玉杰,王雷,孫國瓊,劉梅,王寶杰.  海洋科學(xué). 2016(03)

博士論文
[1]產(chǎn)抗菌脂肽GD菌株篩選及脂肽分離、鑒定與應(yīng)用研究[D]. 莊國宏.揚州大學(xué) 2014
[2]枯草芽胞桿菌B6-1產(chǎn)脂肽和聚-γ-谷氨酸及抗幾種植物病原菌的研究[D]. 王啟軍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]Bacillus subtilis fmbJ產(chǎn)生的脂肽抗微生物效果及安全性評價[D]. 黃現(xiàn)青.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]枯草桿菌脂肽抗嗜水氣單胞菌的機理和應(yīng)用研究[D]. 楊麗莉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]解淀粉芽孢桿菌YN-1抑制植物病原真菌活性物質(zhì)研究[D]. 鄧建良.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3316840