鯉皰疹病毒II型（CyHV-2）是皰疹病毒造血器官壞死病的病原體,主要感染金魚、鯽魚及其變種。它是一種高致病性的病毒,當(dāng)水溫在15℃³0℃時(shí)可造成近100%的死亡率。自2009年以來,在我國(guó)江蘇北部的鯽魚養(yǎng)殖區(qū)春秋季節(jié)連年發(fā)生大量的異育銀鯽患出血病死亡,給我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前關(guān)于CyHV-2的致病機(jī)制尚未完全清楚,疫苗接種仍然是防控CyHV-2最重要的手段。已報(bào)道的針對(duì)CyHV-2的滅活疫苗和亞單位疫苗都可以起到一定的保護(hù)效果,但是這兩種疫苗都需要人工注射接種免疫,不僅耗費(fèi)人力物力,而且在實(shí)際操作中也面臨很多困難。因此,迫切需要研究出一種操作方便、保護(hù)效果突出的疫苗來防控CyHV-2感染。在本研究中,使用桿狀病毒表面展示系統(tǒng)表達(dá)了九個(gè)截短的CyHV-2膜蛋白（ORF25,ORF25C,ORF25D,ORF30,ORF124,ORF131,ORF136,ORF142A,ORF146）和GFP報(bào)告蛋白。通過Western blot分析,結(jié)果顯示GFP和9種膜蛋白成功地展示在重組病毒表面。為了檢測(cè)重組桿狀病毒能否進(jìn)入異育銀鯽細(xì)胞,同時(shí)重組桿狀病毒攜帶... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鯉皰疹病毒Ⅱ型概述
        1.1.1 鯉皰疹病毒Ⅱ型簡(jiǎn)介
        1.1.2 鯉皰疹病毒Ⅱ型基因組結(jié)構(gòu)及編碼蛋白
        1.1.3 鯉皰疹病毒Ⅱ型的體外繁殖
        1.1.4 鯉皰疹病毒Ⅱ型國(guó)內(nèi)外流行現(xiàn)狀
        1.1.5 鯉皰疹病毒Ⅱ型宿主及臨床癥狀
    1.2 鯉皰疹病毒Ⅱ型檢測(cè)方法
        1.2.1 電子顯微鏡診斷技術(shù)
        1.2.2 分子生物學(xué)檢測(cè)
        1.2.3 抗體檢測(cè)
    1.3 鯉皰疹病毒Ⅱ型刺激宿主的免疫反應(yīng)
    1.4 鯉皰疹病毒Ⅱ型疫苗研究
        1.4.1 滅活疫苗
        1.4.2 亞單位疫苗
    1.5 桿狀病毒表面展示系統(tǒng)
        1.5.1 桿狀病毒簡(jiǎn)介
        1.5.2 桿狀病毒作為基因表達(dá)載體
        1.5.3 桿狀病毒表面展示系統(tǒng)
    1.6 本研究的目的、意義及主要內(nèi)容
第二章 展示鯉皰疹病毒Ⅱ型膜蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建
    2.1 材料
        2.1.1 病毒、質(zhì)粒、菌株與細(xì)胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要溶液及配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 pQBD-X系列重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 rAcMNPV-X系列重組桿狀病毒的構(gòu)建
        2.2.3 Western blot檢測(cè)重組蛋白
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 攜帶目標(biāo)基因的重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.2 展示CyHV-2膜蛋白和GFP的重組桿狀病毒構(gòu)建
        2.3.3 Western blot檢測(cè)CyHV-2膜蛋白的表達(dá)
第三章 重組桿狀病毒免疫效果的評(píng)價(jià)
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 異育銀鯽、細(xì)胞和病毒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要溶液及配方
        3.1.4 主要儀器與設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 重組桿狀病毒rAcMNPV-GFP轉(zhuǎn)導(dǎo)GiCK細(xì)胞
        3.2.2 異育銀鯽的免疫
        3.2.3 免疫后宿主基因C3和IL-11表達(dá)水平檢測(cè)
        3.2.4 免疫后異育銀鯽血清中Ig M水平檢測(cè)
        3.2.5 免疫后異育銀鯽攻毒試驗(yàn)
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果和分析
        3.3.1 重組桿狀病毒rAcMNPV-GFP轉(zhuǎn)導(dǎo)GiCK細(xì)胞
        3.3.2 免疫后宿主基因C3和IL-11表達(dá)水平分析
        3.3.3 免疫后異育銀鯽血清中Ig M水平分析
        3.3.4 重組桿狀病毒疫苗保護(hù)率分析
第四章 鯽魚和虹鱒IGM重鏈恒定區(qū)的融合表達(dá)及抗血清的制備
    4.1 材料
        4.1.1 菌株、質(zhì)粒和實(shí)驗(yàn)用兔
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要溶液及配方
        4.1.4 主要儀器與設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 虹鱒和鯽魚Ig M重鏈恒定區(qū)融合蛋白(JY-HZ-IgM)的表達(dá)
        4.2.2 融合蛋白JY-HZ-IgM表達(dá)條件的優(yōu)化
        4.2.3 融合蛋白JY-HZ-IgM的純化
        4.2.4 抗血清的制備及特異性檢測(cè)
        4.2.5 抗血清效價(jià)檢測(cè)
    4.3 結(jié)果和分析
        4.3.1 虹鱒、鯽魚Ig M重鏈恒定區(qū)融合蛋白(JY-HZ-IgM)的表達(dá)
        4.3.2 融合蛋白JY-HZ-IgM表達(dá)條件的優(yōu)化
        4.3.3 融合蛋白JY-HZ-IgM的純化
        4.3.4 抗血清的制備及特異性檢測(cè)
        4.3.5 融合蛋白JY-HZ-IgM抗血清效價(jià)的測(cè)定
第五章 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表達(dá)與免疫學(xué)檢測(cè)方法[J]. 周勇,范玉頂,徐進(jìn),馬杰,江南,劉文枝,曾令兵.  淡水漁業(yè). 2017(01)
[2]2型鯉皰疹病毒雙重PCR快速檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 羅丹,梁利國(guó),謝駿,吳旭東.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(05)
[3]Baculovirus as a highly efficient expression vector in insect and mammalian cells[J]. Yu-chen HU~1 Department of Chemical Engineering,National Tsing Hua University,Hsinchu,Taiwan,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)



本文編號(hào)：3199712