從本實驗室的翹嘴鱖（siniperca chuatsi）轉錄組數(shù)據(jù)庫中搜索得到Leptin-b基因部分cDNA序列,首先通過NCBI數(shù)據(jù)庫比對初步確定序列的準確性,然后通過PCR、測序獲得最終準確的Leptin-b部分核心cDNA序列。根據(jù)該序列,分別設計5’和3’RACE引物進行RACE擴增,得到Leptin-b基因5’和3’末端序列,拼接得到Leptin-b的cDNA序列。應用Genome Walker方法獲得Leptin-b5’側翼區(qū)序列,然后克隆得到Leptin-b基因內含子序列,拼接得到嘴鱖翹Leptin-b基因組DNA序列。Leptin-b基因的cDNA序列全長為698bp,包括471bp的開放讀碼框,編碼157aa的蛋白質,5’-untranslated region（UTR）長度為130bp,3’-UTR長度為94bp；推導的aa序列含有20個aa殘基的信號肽,兩個半胱氨酸殘基以便用于二硫鍵的形成。Leptin-b基因5’側翼區(qū)長度為418bp,上游30bp處發(fā)現(xiàn)典型的TATA box,此外還存在其他調控元件：CREB（155bp）、AP2（209bp）、AP1（242... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 研究概述
        1.1.1 Leptin的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Leptin的研究進程
        1.1.3 Leptin基因的結構
            1.1.3.1 小鼠Leptin基因的結構
            1.1.3.2 人Leptin基因的結構
            1.1.3.3 日本青鳉Leptin基因的結構
            1.1.3.4 紅鰭東方鲀Leptin基因的結構
            1.1.3.5 非洲爪蟾Leptin基因的結構
        1.1.4 Leptin的表達組織
        1.1.5 Leptin蛋白的作用途徑
        1.1.6 Leptin的生物學功能
            1.1.6.1 Leptin與生殖
            1.1.6.2 Leptin與攝食和禁食
            1.1.6.3 Leptin與脂肪代謝
            1.1.6.4 Leptin與應激
    1.2 本文的研究背景及內容
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗魚
        2.1.2 實驗藥品
    2.2 方法
        2.2.1 技術路線
        2.2.2 引物設計
        2.2.3 總RNA提取及檢測
        2.2.4 核心片段克隆
            2.2.4.1 反轉錄
            2.2.4.2 核心片段PCR反應及檢測
            2.2.4.3 PCR產物純化、回收、連接及測序
        2.2.5 3’末端克隆
        2.2.6 5’末端克隆
        2.2.7 5’側翼序列克隆
        2.2.8 內含子克隆
        2.2.9 序列拼接及進化樹構建
        2.2.10 蛋白三級結構預測
        2.2.11 基因組織表達特異性分析
            2.2.11.1 cDNA樣品的制備
            2.2.11.2 實時定量PCR
3 實驗結果與分析
    3.1 RNA質量分析
    3.2 Leptin-b基因cDNA核心片段克隆
    3.3 Leptin-b基因3’末端克隆
    3.4 Leptin-b基因5’末端克隆
    3.5 翹嘴鱖Leptin-b基因cDNA全序列分析
    3.6 Leptin-b基因5’側翼區(qū)及內含子序列克隆與分析
    3.7 Leptin-b氨基酸多重比對及進化樹分析
    3.8 Leptin-b蛋白質三級結構預測
    3.9 翹嘴鱖、草魚Leptins及其受體(Lepr)組織表達結果
4 討論
    4.1 魚類Leptin-a和Leptin-b同源性
    4.2 翹嘴鱖同其他脊椎動物Leptin基因結構、功能及系統(tǒng)進化的關系
    4.3 翹嘴鱖、草魚Leptins基因及其受體組織表達
5 小結
參考文獻
碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3198668