在中國海參是非常重要的經濟物種,隨著海參養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,規(guī)模的不斷擴大,海參的病害防治就顯得尤為重要。因此,我們對仿刺參的兩個免疫相關基因的表達模式以及在仿刺參先天免疫過程中的作用進行研究。在本研究中我們首次克隆了單核巨噬細胞分化因子MMD2和可變淋巴細胞受體VLRA這兩個與仿刺參先天免疫有關的基因。MMD2基因cDNA序列全長1243bp,有一個長777bp的開放閱讀框ORF,編碼258個氨基酸,并且包含HlyIII結構域和7個跨膜結構域,是一個七次跨膜蛋白。VLRA基因cDNA全長3072bp,包括1995bp的ORF,編碼664個氨基酸,有一條信號肽,一個跨膜結構,具有典型的VLR的結構,包括LRRCT、多個LRR模塊及LRRNT結構。通過實時熒光定量PCR分析,MMD2和VLRA在仿刺參的體壁、縱肌、腸和呼吸樹四個組織中都有表達,在仿刺參受到四種常見的海洋細菌刺激之后,MMD2和VLRA的基因在仿刺參四個部位組織中的表達量明顯上升,并隨著細菌濃度的增加,MMD2和VLRA的表達量也隨之升高,這說明了MMD2和VLRA這兩個基因都參與了仿刺參的先天免疫反應。原位雜交實驗結果表明... 

【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省

【文章頁數】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 仿刺參簡介
        1.1.1 仿刺參的分類地位
        1.1.2 仿刺參的形態(tài)特征及經濟價值
        1.1.3 仿刺參的先天免疫
        1.1.4 仿刺參主要的免疫分子和防御機制
    1.2 無脊椎動物的免疫系統(tǒng)
        1.2.1 先天免疫
        1.2.2 模式識別
    1.3 MMD2基因結構功能及相關介紹
        1.3.1 MMD基因結構和功能
        1.3.2 單核巨噬細胞分化過程
    1.4 VLR的結構及功能特征
        1.4.1 可變淋巴細胞受體
        1.4.2 VLR的蛋白結構
        1.4.3 VLR的基因結構
        1.4.4 VLR的抗原結合
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 仿刺參樣品
    2.2 主要藥品試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 質粒與菌株
        2.2.4 實驗配制溶液
    2.3 方法
        2.3.1 RNA的提取
        2.3.2 cDNA模板的制備
        2.3.3 引物的設計
        2.3.4 基因克隆
        2.3.5 切膠回收
        2.3.6 轉菌測序
        2.3.7 提取質粒
        2.3.8 生物信息學分析
        2.3.9 實時熒光定量PCR
        2.3.10 原位雜交
        2.3.11 原核表達
        2.3.12 蛋白純化
        2.3.13 包涵體復性
        2.3.14 蛋白濃度測定
        2.3.15 細菌結合實驗
3 實驗結果
    3.1 基因全長及信息學分析
        3.1.1 Aj-MMD2和Aj-VLRA的基因結構
        3.1.2 Aj-MMD2和Aj-VLRA的序列比對
        3.1.3 進化樹分析
    3.2 實時熒光定量PCR
    3.3 原位雜交
    3.4 原核表達
    3.5 細菌結合實驗
4 討論
    4.1 MMD2和VLRA基因結構特征
    4.2 Aj-MMD2和Aj-VLRA基因表達模式
    4.3 Aj-MMD2和Aj-VLRA在仿刺參體內的分布
    4.4 Aj-VLRA重組蛋白的結合能力
結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]光照強度對不同養(yǎng)殖方式下刺參幼參生長和消化酶活性的影響[J]. 魏子仲,趙文.  應用生態(tài)學報. 2014(01)



本文編號：3197255