硫氧還蛋白（Trx）是一類高度保守的蛋白,存在于多種生物中,在生物抗氧化應(yīng)激和維持二硫鍵以保持蛋白正確功能等方面發(fā)揮著重要作用。殺魚愛德華氏菌是一種危害嚴(yán)重的魚類致病菌,但其致病機(jī)制還很不清晰�；蚪M分析表明殺魚愛德華氏菌編碼了三種硫氧還蛋白,分別是A型硫氧還蛋白（TrxA）、C型硫氧還蛋白（TrxC）和H型硫氧還蛋白（TrxH）,但它們的生物學(xué)功能尚不清楚,尤其是TrxH,目前還沒有關(guān)于病原菌TrxH作用機(jī)制研究的報(bào)道。基于此,本研究旨在闡述殺魚愛德華氏菌TrxH在細(xì)菌抗逆性和致病性中的作用。通過對(duì)殺魚愛德華氏菌TrxH蛋白序列和結(jié)構(gòu)分析,本研究發(fā)現(xiàn)H型硫氧還蛋白具有保守基序WCXXC和QSTL,二級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明該蛋白存在5個(gè)α螺旋和4個(gè)β折疊。借助于熒光定量PCR對(duì)trxH基因的表達(dá)進(jìn)行了研究,結(jié)果表明在氧化應(yīng)激、缺鐵、低pH等逆境條件下以及感染宿主細(xì)胞時(shí)trxH的表達(dá)顯著上調(diào),這些結(jié)果表明TrxH很有可能在細(xì)菌適應(yīng)逆境環(huán)境和宿主胞內(nèi)環(huán)境等方面發(fā)揮作用;同時(shí)發(fā)現(xiàn)trxH的表達(dá)受到殺魚愛德華氏菌全局性調(diào)控因子----鐵調(diào)節(jié)因子Fur的負(fù)調(diào)控,這是首次發(fā)現(xiàn)TrxH受Fur調(diào)控。為研究t... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

硫氧還蛋白系統(tǒng)作用的主要過程

結(jié)果與分析3 結(jié)果與分析3.1 trxH 基因序列特征及蛋白結(jié)構(gòu)TrxH 由 125 個(gè)氨基酸編碼組成，并且含有硫氧還蛋白的結(jié)構(gòu)域。通過 BLAST 序列分析發(fā)現(xiàn)殺魚愛德華氏菌的 TrxH 與沙眼奈瑟菌、敗血性巴斯德菌、木偶蟲、貪銅菌、嗜血紅蛋白嗜血桿菌、皮氏羅爾斯頓菌和施氏假單胞菌中的硫氧還蛋白的同源性在38.5%-49.6%不等，與人類的硫氧還蛋白的同源性為 37.1%。值得注意的是，與殺魚愛德華氏菌的 TrxH 同源性超過 30%的物種中，除了愛德華菌屬外并沒有常見的動(dòng)物致病菌。殺魚愛德華氏菌 TrxH 中有 WCXXC 保守活性位點(diǎn)[71]，同時(shí)還有 QSTL/M 保守活性位點(diǎn)。對(duì)其蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明該蛋白存在 5 個(gè)α螺旋和 4 個(gè)β折疊（圖 3-1）。對(duì)殺魚愛德華氏菌的 TrxH 三級(jí)結(jié)構(gòu)的建模如圖 3-2 所示。

圖 3-2 TrxH 三級(jí)結(jié)構(gòu)模型Fig. 3-2 TrxH theoretical modelling 的第 4 個(gè)α螺旋。he fourth α helix of TrxH.的獲得華氏菌 trxH 功能，對(duì)編碼的第 24~110 位氨得了敲除株 TX01 trxH；與此同時(shí)也構(gòu)建rxH 的遺傳突變體，trxH 回復(fù)互補(bǔ)株的構(gòu)建克隆了 trxH 基因缺失片段和 trxH 基因片段，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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