本試驗選取與羅非魚抗菌機制（溶菌→抗原呈遞→除菌）相關的C型溶菌酶、MHCⅡ、IgM、Hepcidin基因作為研究目標,采用中心復合試驗設計和響應曲面分析法,在試驗室條件下研究了溫度（18-34℃）、無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）濃度（0.4-6.4×105cfu/mL）對此4個基因在吉富羅非魚幼魚腸（intestine）、肝臟組織（hepatopancreas）基因表達量的聯(lián)合效應。結果表明:（1）溫度一次效應、二次效應對羅非魚腸、肝臟組織IgM基因表達量均有極顯著影響（P<0.01）;無乳鏈球菌濃度一次效應對基因表達量無顯著影響（P>0.05）。只在腸組織,溫度與無乳鏈球菌濃度間互作效應顯著（P<0.05）,且溫度效應大于濃度。分別建立了吉富羅非魚腸、肝臟IgM基因表達量模型（方程中T代表溫度,S代表無乳鏈球菌）:Y-i=0.89416-0.11213T+0.40982S-5.49×10-3T×S+3.69×10-3T2-0.041717S2Y-h=5.91988-0.49657T-0.3665S+8.25×10-3T×S+0.01... 

【文章來源】：廣東海洋大學廣東省

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 無乳鏈球菌概述
    1.2 魚類免疫相關因子的表達調控
        1.2.1 不同因子脅迫對魚類IgM表達的影響
        1.2.2 魚類主要組織相容性復合體的表達研究
        1.2.3 環(huán)境因子對魚類溶菌酶表達的影響
        1.2.4 Hepcidin在魚類中的表達調控
    1.3 研究目的與意義
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究意義
2 水溫、無乳鏈球菌濃度對吉富羅非魚IgM基因表達的聯(lián)合效應
    2.1 試驗材料與方法
        2.1.1 材料來源
        2.1.2 試驗設計
        2.1.3 試驗管理
        2.1.4 組織樣品的采集
        2.1.5 Trizol法提取總RNA
        2.1.6 總RNA的DNase I酶消化
        2.1.7 溫度、無乳鏈球菌應激下吉富羅非魚IgM基因的表達差異
        2.1.8 統(tǒng)計分析
    2.2 試驗結果
        2.2.1 模型的恰當性
        2.2.2 模型的建立
        2.2.3 雙因子對基因表達量影響的響應曲面分析
        2.2.4 模型擬合度與學生化殘差正態(tài)概率分析
    2.3 討論
        2.3.1 無乳鏈球菌濃度對羅非魚IgM基因表達的影響
        2.3.2 溫度對羅非魚IgM基因表達的影響
        2.3.3 模型的建立及意義
3 水溫、無乳鏈球菌濃度對吉富羅非魚MHCⅡ基因表達的聯(lián)合效應
    3.1 試驗材料與方法
        3.1.1 材料來源
        3.1.2 試驗設計
        3.1.3 試驗管理
        3.1.4 組織樣品的采集
        3.1.5 Trizol法提取總RNA
        3.1.6 總RNA的DNase I酶消化
        3.1.7 溫度、無乳鏈球菌應激下吉富羅非魚MHCII基因的表達差異
        3.1.8 統(tǒng)計分析
    3.2 試驗結果
        3.2.1 模型的恰當性
        3.2.2 模型的建立
        3.2.3 溫度、無乳鏈球菌濃度對MHCII基因表達量的響應曲面分析
        3.2.4 模型擬合度與學生化殘差正態(tài)概率分析
    3.3 討論
4 水溫與無乳鏈球菌濃度對吉富羅非魚C型溶菌酶基因表達的聯(lián)合效應
    4.1 試驗材料與方法
        4.1.1 材料來源
        4.1.2 試驗設計
        4.1.3 試驗管理
        4.1.4 組織樣品的采集
        4.1.5 Trizol法提取總RNA
        4.1.6 總RNA的DNase I酶消化
        4.1.7 雙因子組合應激下羅非魚C型溶菌酶基因的表達差異
        4.1.8 統(tǒng)計分析
    4.2 試驗結果
        4.2.1 模型的恰當性
        4.2.2 模型的建立
        4.2.3 雙因子組合對C型溶菌酶基因表達量的影響的響應曲面分析
        4.2.4 模型擬合度與學生化殘差正態(tài)概率分析
    4.3 討論
        4.3.1 無乳鏈球菌濃度對羅非魚C型溶菌酶基因表達的影響
        4.3.2 溫度對羅非魚C型溶菌酶基因表達的影響
        4.3.3 模型的建立及意義
5 水溫與無乳鏈球菌濃度對吉富羅非魚Hepcidin基因表達的聯(lián)合效應
    5.1 試驗材料與方法
        5.1.1 材料來源
        5.1.2 試驗設計
        5.1.3 試驗管理
        5.1.4 組織樣品的采集
        5.1.5 Trizol法提取總RNA
        5.1.6 總RNA的DNase I酶消化
        5.1.7 雙因子組合應激下羅非魚Hepcidin基因的表達差異
        5.1.8 統(tǒng)計分析
    5.2 試驗結果
        5.2.1 模型的恰當性
        5.2.2 模型的建立
        5.2.3 雙因子組合對Hepcidin基因表達量的影響的響應曲面分析
        5.2.4 模型擬合度與學生化殘差正態(tài)概率分析
    5.3 討論
6 結論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師介紹


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]溫度對尼羅羅非魚無乳鏈球菌毒力的影響[J]. 劉志剛,可小麗,盧邁新,朱華平,高風英.  水產(chǎn)學報. 2013(11)
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[7]急性溫度應激對吉富品系尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）幼魚生化指標和肝臟HSP70 mRNA表達的影響[J]. 強俊,楊弘,王輝,徐跑,何杰.  海洋與湖沼. 2012(05)
[8]飼料中維生素D3水平對黃鱔抗菌肽hepcidin基因表達的影響[J]. 黎德兵,李超,張龔煒,唐勇,周定剛,李學偉.  動物營養(yǎng)學報. 2012(08)
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[10]近江牡蠣HSC70基因對溶藻弧菌感染的反應[J]. 劉志剛,張其中,張占會,崔淼.  中國水產(chǎn)科學. 2012(03)

博士論文
[1]基于全基因組序列分析篩選羅非魚源無乳鏈球菌ZQ0910株保護性抗原及其免疫保護性研究[D]. 王蓓.中國海洋大學 2013

碩士論文
[1]MHC-Ⅱ類分子在鯉魚黏膜免疫中的作用[D]. 張彥.山東師范大學 2010
[2]高溫逆境下大菱鲆體表生理生化特性研究[D]. 黃智慧.中國海洋大學 2010



本文編號：3094302