在脊椎動物中,性腺的生殖功能維持需要多種基因的表達,同時這些基因也受到多種轉錄因子調節(jié)。GATA家族轉錄因子就是其中之一,它們因結構上包含兩個保守的鋅指結構能識別靶基因啟動子序列上的WGATAR基序而得名。同時該家族參與多種組織的發(fā)育、分化和基因表達過程。在GATA家族6個成員中Gata4/6在卵巢和精巢中均有表達。已有研究表明,在脊椎動物中Gata4/6在卵巢的濾泡細胞（Follicle cells）和精巢的支持細胞（Sertoli cells）、萊氏細胞（Leydig cells）中表達。并且Gata6也在人和小鼠的生殖細胞中表達。在小鼠卵/精巢中缺失Gata4/6導致性腺發(fā)育途徑中的相關基因表達大量下調,生殖細胞數(shù)量減少,并且阻礙配子生成。同時,Gata4和Gata6在類固醇基因調控上功能相似。在硬骨魚中,斑馬魚研究了心臟導管中Gata4的功能,同時本實驗前期利用real-time PCR和原位雜交等手段對羅非魚的Gata4/6的表達模式和功能研究進行了初步的探討。在羅非魚中,Gata4在成體卵巢的顆粒細胞和鞘膜細胞（Theca cells）以及成體精巢的支持細胞和輸精管上皮細胞... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略語對照表
第一章 文獻綜述
    1 生殖系統(tǒng)以及類固醇生成
        1.1 下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸
        1.2 卵巢和卵子發(fā)生
            1.2.1 卵巢
            1.2.2 卵子發(fā)生
        1.3 精巢和精子發(fā)生
            1.3.1 精巢
            1.2.2 精子發(fā)生
        1.4 配子發(fā)生過程中的類固醇激素生成
    2 GATA家族
        2.1 GATA家族成員的結構以及功能
        2.2 Gata4/6的研究現(xiàn)狀
            2.2.1 Gata4/6在性腺的表達
            2.2.2 Gata4/6在性腺的功能研究
            2.2.3 Gata4/6與類固醇生成
    3 科學問題的提出和本研究的目的意義
第二章 GATA6性腺表達初步研究
    1 引言
    2 實驗材料和儀器
        2.1 實驗動物
        2.2 實驗試劑和儀器
        2.3 有關試劑的配制
        2.4 實驗方法
            2.4.1 羅非魚性腺總RNA提取
            2.4.2 cDNA的合成
            2.4.3 性腺Gata6表達分析
                2.4.3.1 Gata6 mRNA在性腺不同發(fā)育階段的表達
                2.4.3.2 性腺轉錄組Gata6表達分析
            2.4.4 Gata6多克隆抗體制備檢測
                2.4.4.1 Gata6重組蛋白表達、檢測和純化
                2.4.4.2 Gata6多克隆抗體制備
                2.4.4.3 Gata6 Western blot檢測
                2.4.4.4 Gata6在性腺組織中的免疫組化檢測
    3 結果
        3.1 Gata6在不同時期性腺中的表達
        3.2 Gata6抗體檢測以及細胞定位
    4 討論
        4.1 Gata6在性腺中的表達
        4.2 Gata6在雌雄性腺的細胞定位
第三章 GATA4/6功能的初步研究
    1 引言
    2 實驗材料和儀器
        2.1 實驗動物
        2.2 實驗試劑和儀器
        2.3 有關試劑的配制
        2.4 實驗方法
            2.4.1 羅非魚 gtzto4/6(JCRISPR/Cas9 敲除
                2.4.1.1 敲除靶向序列的選擇
                2.4.1.2 gRNA和Cas9 mRNA的合成
                2.4.1.3 顯微注射
                2.4.1.4 基因組DNA的提取、目的片段的擴增及酶切檢測
                2.4.1.5 敲除陽性魚的篩選
                2.4.1.6 組織學檢測
                2.4.1.7 免疫組化
                2.4.1.8 real-time PCR和RT-PCR
                2.4.1.9 激素測定
                2.4.1.10 統(tǒng)計卵母細胞時相
                2.4.1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
            2.4.2 gata6突變F1代建立
    3 結果
        3.1 敲除序列的選擇以及突變檢測
        3.2 陽性敲除魚的篩選和敲除效率統(tǒng)計
        3.3 Gata4/6缺失對雌魚性腺基因表達和血清激素水平的影響
        3.4 Gata4/6缺失對雄魚性腺基因表達和血清激素水平的影響
        3.5 Gata6突變F1代魚檢測
    4 討論
        4.1 CRISPR/Cas9高效敲除Gata4/6
        4.2 Gata4/6參與類固醇生成和雌雄配子生成
        4.3 Gata4/6功能上的相關性和互補性
        4.4 脊椎動物Gata4/6在進化上功能的一致性
結論
參考文獻
致謝
在讀期間所發(fā)表的文章
在讀期間參加科研情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉錄因子GATA-2在脊椎動物發(fā)育過程中的作用[J]. 張未麗,劉智皓,吳風瑞,黃寶鋒,韓飛,孫運侶,王德壽.  四川動物. 2009(06)
[2]半滑舌鰨性腺分化的組織學觀察[J]. 馬學坤,柳學周,溫海深,徐永江,張立敬.  海洋水產研究. 2006(02)

碩士論文
[1]尼羅羅非魚Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗體制備及其在正常發(fā)育和性逆轉性腺中的表達研究[D]. 王婷茹.西南大學 2013
[2]尼羅羅非魚性腺發(fā)育過程的轉錄組學研究及Fox家族生物信息學分析[D]. 袁靜.西南大學 2013
[3]尼羅羅非魚GATA因子表達及其功能的初步研究[D]. 葉凱.西南大學 2012
[4]牙鲆Paralichthys olivaceus性腺分化與發(fā)育的組織學研究[D]. 孫朝徽.東北農業(yè)大學 2008



本文編號：3081845