本實驗以兇猛肉食性軍曹魚,溫和肉食性卵形鯧鲹,雜食性羅非魚為實驗對象,采用RACE-PCR技術(shù)克隆了卵形鯧鲹、軍曹魚GLUT4基因,分析其在結(jié)構(gòu)和進化上的區(qū)別;比較三種食性養(yǎng)殖魚類在不同飼料糖水平（高CH,中CM,低CL,羅非魚:40%、30%、20%,卵形鯧鲹:39%、26%、13%,軍曹魚:36%、24%、12%）下各組織中GLUT4基因表達量的變化。研究不同飼料糖水平對尼羅羅非魚生長和糖代謝的影響,并結(jié)合糖耐量實驗對尼羅羅非魚血糖、胰島素、類胰島素生長因子1（IGF-1）等血漿生化指標及肝/肌糖原,GLUT4基因表達進行了檢測,旨在探索不同食性魚類對葡萄糖利用能力低下的耐受機理與分子機制。主要研究內(nèi)容如下:1、卵形鯧鲹和軍曹魚的GLUT4基因克隆和序列分析成功克隆了卵形鯧鲹GLUT4（GB:KP693688.1）基因全長1937 bp,ORF為1521bp,編碼506aa;軍曹魚GLUT4（GB:KP684143.1）全長2241bp,ORF為1524b bp,編碼507aa。卵形鯧鲹和軍曹魚GLUT4序列和人類的GLUT4具有較高的同源性,多序列比較分析顯示,關(guān)鍵功能位點如FQ... 

【文章來源】：廣東海洋大學廣東省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞 （Abbreviation）
1 前言
    1.1 魚類對糖利用的研究進展
    1.2 魚類GLUT4研究進展
        1.2.1 胰島素敏感性糖轉(zhuǎn)運蛋白GLUT4
        1.2.2 GLUT4基因結(jié)構(gòu)的演化
        1.2.3 魚類GLUT4表達的調(diào)控
    1.3 本論文的研究意義與目的
2 卵形鯧鲹和軍曹魚GLUT4分子克隆及序列分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 儀器與設備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液的配制
        2.1.5 生物信息學分析方法
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗樣品采集
        2.2.2 DH5α感受態(tài)細胞的制備
        2.2.3 總RNA的提取和檢測
        2.2.4 c DNA第一鏈的合成
        2.2.5 引物設計
    2.3 卵形鯧鲹和軍曹魚GLUT4基因克隆
        2.3.1 PCR產(chǎn)物的純化回收
        2.3.2 PCR純化產(chǎn)物的連接轉(zhuǎn)化
        2.3.3 陽性菌落PCR鑒定與測序
        2.3.4 卵形鯧鲹GLUT4基因的RACE克隆
    2.4 結(jié)果和分析
        2.4.1 核心片段獲取
        2.4.2 GLUT4克隆結(jié)果與序列分析
    2.5 討論
3、不同飼料糖水平對不同食性魚類GLUT4組織特異性表達的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料及飼養(yǎng)管理
        3.1.2 儀器與試劑
        3.1.3 樣品采集
        3.1.4 熒光定量PCR
        3.1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 GLUT4的組織特異性表達
        3.2.2 不同飼料糖水平對軍曹魚、卵形鯧鲹、軍曹魚組織中GLUT4表達量的影響
    3.3 討論
4 三種不同飼料糖水平對尼羅羅非魚生長、糖代謝及GLUT4表達的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料及飼養(yǎng)管理
        4.1.2 樣品采集
        4.1.3 血液生化指標測定
        4.1.4 糖代謝酶活性的測定
        4.1.5 總RNA提取和熒光定量c DNA模板的合成
        4.1.6 GLUT4實時熒光定量檢測
        4.1.7 相關(guān)指標計算及數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 三種不同飼料糖水平對尼羅羅非魚生長的影響
        4.2.2 三種不同飼料糖水平對尼羅羅非魚血液生化指標的影響
        4.2.3 三種不同飼料糖水平對尼羅羅非魚肝肌糖原的影響
        4.2.4 三種不同飼料糖水平對尼羅羅非魚糖代謝關(guān)鍵酶活性的影響
        4.2.5 三種不同飼料糖水平對尼羅羅非魚GLUT4表達的影響
    4.3 討論
5 三種不同飼料糖水平下，注射葡萄糖對尼羅羅非魚糖代謝和GLUT4表達的影響
    5.1 實驗材料及飼養(yǎng)管理
    5.2 材料與方法
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 三種不同飼料糖水平下，注射葡萄糖對尼羅羅非魚血漿生化指標的影響
        5.3.2 三種不同飼料糖水平下，注射葡萄糖對尼羅羅非魚肝/肌糖原的影響
        5.3.3 三種不同飼料糖水平下，注射葡萄糖對尼羅羅非魚肝臟糖代謝酶GK、PK和PEPCK的影響
        5.3.4 三種不同飼料糖水平下，注射葡萄糖對尼羅羅非魚肌肉中GLUT4，肝臟中IGF-1 表達量的影響
    5.4 討論
6 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]不同食性魚類糖代謝關(guān)鍵酶基因克隆及表達比較研究[D]. 李淑云.廣東海洋大學 2015
[3]不同添加量的糖對軍曹魚生長代謝的影響[D]. 劉迎隆.中國海洋大學 2014
[4]飼料中不同淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪水平對羅非魚生長及生理生化指標的影響[D]. 陳孟瑤.集美大學 2014
[5]注射葡萄糖對羅非魚糖代謝、胰島素受體和GLUT4基因表達的影響[D]. 劉含亮.山東農(nóng)業(yè)大學 2012
[6]鯉胰島素樣生長因子的克隆與表達研究[D]. 商漢橋.華中農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：3078354