日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）是重要的淡水養(yǎng)殖蝦類,因其經常遭到病原體侵染而造成巨大的經濟損失,因此對日本沼蝦的免疫系統(tǒng)中免疫機制的研究具有重要的意義。本實驗室研究過一條日本沼蝦硫氰酸生成酶序列（MnRHOD1）,利用該序列在日本沼蝦轉錄組中檢索到4條相似序列,分別命名為MnRHOD2、MnRHOD3、MnRHOD4、MnRHOD5。本研究成功誘導并表達了日本沼蝦硫氰酸生成酶MnRHOD2--MnRHOD5,并檢測其對應的融合蛋白的活性,4個成功誘導表達的蛋白都有酶活特性。4條基因的表達模式各不相同,MnRHOD2、MnRHOD3、MnRHOD5基因在肝胰腺中相對表達量最高,而MnRHOD4在鰓中表達量最高;MnRHOD2、MnRHOD4、MnRHOD5這三個基因在維氏氣單胞菌刺激后都呈現(xiàn)出上調趨勢,MnRHOD3呈現(xiàn)出下調的趨勢。為驗證日本沼蝦硫氰酸生成酶基因是否與氧化應激相關,我們用RNAi的方式將MnRHOD2敲低,MnRHOD2敲低后ROS（活性氧）和MDA（丙二醛）的水平都升高了。進一步在細菌中驗證日本沼蝦硫氰酸生成酶2是否有抗氧化性,在對抗吩嗪... 

【文章來源】：河北大學河北省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞內氧化還原平衡的示意圖(Trachoothametal.,2009)

圖 2 硫氰酸生成酶核酸序列及其推導的氨基酸序列 A.MnRHOD2基因 B.MnRHOD3基因 C.RHOD4 基因 D.MnRHOD5 基因Fig. 2 The nucleotide and deduced amino acid sequences of MnRHODs.2.2 硫氰酸生成酶序列的蛋白質理化性質分析序列用蛋白質分析網站(http://web.expasy.org/protparam/)對 ORF 進行理化性質分果如表 1：表 1 硫氰酸生成酶序列的蛋白質分析結果Tab. 1 The protein analysis result of rhodanase sequencesMnRHOD1 MnRHOD2 MnRHOD3 MnRHOD4 MnRHOD5ORF(bp) 351 504 453 372 471氨基酸殘基117 168 151 124 157分子量12490 19183 17057 13921 17619信號肽 無 有 無 無 無理論 PI 5.38 4.96 8.9 5.27 7.71

第 2 章 日本沼蝦硫氰酸生成酶基因序列生物信息學分析帶負電荷氨基酸（Asp+Glu）19 30 17 21 19帶正電荷氨基酸（Arg+Lys）16 22 20 17 20亞細胞定位預測 細胞質 細胞外 細胞質 細胞質 細胞質2.2.3 日本沼蝦硫氰酸生成酶蛋白序列比對CLC Main Workbench 5 軟件進行序列比對結果，紅色框中是 6 個氨基酸的活性位點如圖 3：

【參考文獻】：
期刊論文
[1]青蝦“軟殼綜合癥”病原及其特性[J]. 潘曉藝,沈錦玉,李建應,賀寶祥,尹文林,郝貴杰,徐洋,姚嘉赟.  微生物學通報. 2009(10)
[2]養(yǎng)殖青蝦“紅鰓病”病原的研究[J]. 沈錦玉,錢冬,劉問,尹文林,沈智華,曹錚,吳穎蕾,張念慈.  浙江海洋學院學報(自然科學版). 2000(03)



本文編號：3075967