本研究采用cDNA末端快速擴增（RACE）等技術(shù)獲得海帶配子體細胞一個γ-亞型碳酸酐酶（CA）基因的cDNA及DNA全長序列。其cDNA長為1 618 bp,編碼由305個氨基酸組成的蛋白;DNA長為11 812 bp,具6個內(nèi)含子,將開放閱讀框（ORF）分割成7個外顯子;其具有一個gamma-CA的結(jié)構(gòu)域,并具有一個獨特的左手平行β-螺旋結(jié)構(gòu)域;由36個CA的氨基酸序列所構(gòu)建的聚類圖顯示,該CA與其他物種的γ-CA聚為一支。因而,將該克隆的基因命名為Sjγ-CA。為了解其編碼蛋白的功能,將Sjγ-CA的ORF亞克隆至表達載體pET28a上,導(dǎo)入大腸桿菌表達菌株BL21中,培養(yǎng)并誘導(dǎo)目的基因表達,親和層析以純化重組蛋白。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE電泳）、免疫印跡和質(zhì)譜技術(shù)鑒定結(jié)果表明,純化所獲得的重組蛋白是Sjγ-CA。利用電極法和分光光度計法分別檢測重組的Sjγ-CA在CO2與示,重組Sjγ-CA的水合酶比活力為0.82 U/mg,但沒有酯酶活性,從而從功能上鑒定了Sjγ-CA。該研究為后續(xù)探討Sjγ-CA在海帶配子體乃至孢子體細胞或組織中的亞細胞定位等研究奠定了基礎(chǔ)... 

【文章來源】：水產(chǎn)學(xué)報. 2020,44(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：12 頁

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3054599