蟹類作為一種營養(yǎng)價值高、肉質鮮美的水產品,廣受消費者喜愛,但是隨之引起的食物過敏發(fā)病率持續(xù)上升。本文以擬穴青蟹（Scylla paramamosain）為研究對象,對青蟹中的新型過敏原肌質鈣結合蛋白（sarcoplasmic calcium binding protein,SCP）進行重組表達,對其抗原表位進行定位分析,探討酶法交聯(lián)反應、美拉德反應對重組SCP（rSCP）致敏性的影響,以期為過敏性疾病診斷和低致敏性食品開發(fā)提供理論依據(jù)。本研究首先從擬穴青蟹肌肉中純化出分子量約20 kDa的SCP,通過免疫新西蘭大白兔獲得兔抗青蟹SCP血清,純化得到兔抗SCP-IgG多克隆抗體。構建表達載體pET-22b-SCP,在E.coli Rossetta菌株中誘導表達獲得可溶性的rSCP。圓二色譜、抑制性ELISA、免疫雜交分析結果顯示,rSCP與天然SCP（nSCP）均呈典型的α/β蛋白特征,在Ig E結合活性方面能夠相互抑制,在高溫（60℃¹00℃）、弱酸（pH 2.0⁵.0）、強堿（pH 10.0¹1.0）條件下均易發(fā)生聚合... 

【文章來源】：集美大學福建省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 食物過敏概況
    1.2 食物過敏反應機制及診斷
    1.3 水產食物過敏及其過敏原
    1.4 水產過敏原抗原表位的研究進展
    1.5 食物過敏原的加工消減技術
    1.6 本研究的目的和意義
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動物
        2.1.2 甲殼類過敏患者血清
        2.1.3 主要儀器設備
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 SCP的純化及抗體制備
        2.2.2 SCP的重組表達
        2.2.3 SCP的性質分析
        2.2.4 SCP的抗原表位分析
        2.2.5 rSCP的食品加工處理
        2.2.6 統(tǒng)計分析
第3章 結果與分析
    3.1 擬穴青蟹SCP的純化及抗體制備
        3.1.1 擬穴青蟹SCP的純化鑒定
        3.1.2 SCP多克隆抗體純化及效價分析
    3.2 擬穴青蟹SCP的重組表達
        3.2.1 重組表達載體構建
        3.2.2 重組蛋白的表達、純化及鑒定
    3.3 SCP的性質分析
        3.3.1 rSCP與nSCP的pH穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定性比較
        3.3.2 rSCP與nSCP的二級結構比較
        3.3.3 rSCP與nSCP的IgE結合活性比較
        3.3.4 不同來源SCP的免疫交叉反應分析
        3.3.5 rSCP小鼠敏化模型分析
        3.3.6 rSCP對患者外周血嗜堿性粒細胞的激活能力分析
    3.4 SCP抗原表位分析
        3.4.1 噬菌體隨機肽庫親和淘選
        3.4.2 SCP的IgG抗原表位分析
        3.4.3 SCP的IgE抗原表位分析
        3.4.4 IgG表位與IgE表位的分析比較
    3.5 食品加工處理對rSCP致敏性的影響
        3.5.1 食品加工處理條件的優(yōu)化
        3.5.2 食品加工處理對rSCP結構及致敏性的影響
        3.5.3 食品加工產物的消化穩(wěn)定性分析
        3.5.4 美拉德反應產物的糖化位點鑒定
        3.5.5 樹突細胞對rSCP加工產物的吞噬情況
        3.5.6 rSCP加工產物對嗜堿性粒細胞的活化能力分析
第4章 討論
    4.1 SCP的重組表達與性質分析
    4.2 SCP的抗原表位分析
    4.3 食品加工處理對SCP結構與表位的影響
第5章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
附錄
在學期間科研成果情況


【參考文獻】：
期刊論文
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[6]擬穴青蟹精氨酸激酶的過敏性及其構效關系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大學 2013
[7]章魚過敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大學 2012
[8]擬穴青蟹過敏原的性質研究[D]. 余惠琳.集美大學 2011
[9]蝦類過敏原的活性分析及其抗原表位的研究[D]. 鄭禮娜.中國海洋大學 2011
[10]牛乳中α-乳白蛋白的表位定位研究[D]. 文學方.南昌大學 2010



本文編號：2924073