肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2(Myocyte Enhancer Factor 2, MEF2)是MADS-Box轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子超家族成員之一。在脊椎動(dòng)物中,MEF2家族由A、B、C、D四種亞型組成,廣泛存在于平滑肌,骨骼肌和心肌等肌細(xì)胞中；是調(diào)控肌肉發(fā)生發(fā)育過(guò)程中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子之一,可激活多種參與肌肉發(fā)生發(fā)育、肌肉組織再生等相關(guān)基因的表達(dá)。本試驗(yàn)以黃鱔為實(shí)驗(yàn)材料,克隆出黃鱔MEF2基因家族MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D四個(gè)成員的全序列,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究了黃鱔MEF2家族四基因胚后不同發(fā)育階段、成魚(yú)不同組織和黃鱔骨骼肌損傷再修復(fù)試驗(yàn)中的表達(dá)變化規(guī)律。主要研究結(jié)果如下：采用常規(guī)RT-PCR和同源克隆等技術(shù)克隆獲得黃鱔MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D的ORF區(qū)序列,登錄號(hào)分別為：KM103279、KM103280、KM103281和KM103282。長(zhǎng)度分別為1593bp、1419bp、1864bp和2412bp,分別編碼482,472,477和535個(gè)氨基酸。序列分析發(fā)現(xiàn)MEF2基因家族四個(gè)成員均具有MADS-box功能域和MEF2功能域。MEF2家族四基因在黃鱔胚后不同發(fā)育階段和成魚(yú)的不同組織中均有不同程度的表達(dá)。黃鱔MEF2基因家族在黃鱔5g-180g發(fā)育階段呈現(xiàn)有一定波動(dòng)但整體上呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),其中MEF2C最為明顯。在不同組織中,MEF2基因家族四個(gè)成員在骨骼肌的表達(dá)量顯著高于其他組織(p0.05),其中MEF2A和MEF2D在骨骼肌中的表達(dá)量最高,心臟次之,其他組織表達(dá)量很低。MEF2B和MEF2C在骨骼肌中的表達(dá)量最高,其他組織表達(dá)量幾乎無(wú)差異,且表達(dá)量都很低。本研究通常骨骼肌損傷建模,采用冰凍切片技術(shù)觀(guān)察到骨骼肌損傷再修復(fù)的過(guò)程,通常實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)發(fā)現(xiàn)黃鱔MEF2基因家族在黃鱔骨骼肌損傷再修復(fù)過(guò)程中表現(xiàn)出先上升后下降最后恢復(fù)到損傷前表達(dá)水平。
【學(xué)位單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：S917.4;Q78
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 黃鱔的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值
    1.2 黃鱔的藥用價(jià)值
    1.3 黃鱔的研究進(jìn)展
    1.4 肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2基因家族（MEF2基因家族）研究進(jìn)展
        1.4.1 MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族
        1.4.2 MEF2家族簡(jiǎn)介
        1.4.3 MEF2的結(jié)構(gòu)
        1.4.4 MEF2在肌肉發(fā)育中的調(diào)控作用
        1.4.5 MEF2因子在肌肉組織中的表達(dá)研究
        1.4.6 MEF2因子的組織表達(dá)研究
        1.4.7 MEF2A研究進(jìn)展
        1.4.8 MEF2B研究進(jìn)展
        1.4.9 MEF2C研究進(jìn)展
        1.4.10 MEF2D研究進(jìn)展
    1.5 損傷試驗(yàn)建模
        1.5.1 麻醉劑
        1.5.2 損傷藥劑
        1.5.3 冰凍切片技術(shù)與SDH酶組化染色
    1.6 研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 取樣器材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)取材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA提取
        2.2.2 RNA檢測(cè)
        2.2.3 總RNADnase處理
        2.2.4 感受態(tài)制備
        2.2.5 cDNA第一鏈合成
        2.2.6 引物設(shè)計(jì)
        2.2.7 MEF2A,MEF2B,MEF2C和MEF2D編碼區(qū)PCR擴(kuò)增
        2.2.8 PCR擴(kuò)增片段的回收與純化
        2.2.9 MEF2基因ORF區(qū)產(chǎn)物的連接和轉(zhuǎn)化
        2.2.10 挑克�。ㄋ{(lán)白斑陽(yáng)性克隆篩選）和測(cè)序
        2.2.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.12 數(shù)據(jù)處理
        2.2.13 冰凍切片的制備SDH酶組化染色
        2.2.14 冰凍切片制備
        2.2.15 SDH酶組化染色流程
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D克隆結(jié)果分析
        3.1.1 肌肉總RNA的電泳結(jié)果
        3.1.2 MEF2基因ORF區(qū)PCR克隆電泳結(jié)果
    3.2 黃鱔MEF2基因序列分析
    3.3 黃鱔MEF2基因家族氨基酸同源性比較與遺傳距離分析
    3.4 氨基酸序列比對(duì)和構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    3.5 氨基酸含量比例
    3.6 黃鱔MEF2基因家族的時(shí)空表達(dá)結(jié)果分析
    3.7 黃鱔MEF2基因家族胚后不同發(fā)育階段表達(dá)情況
    3.8 黃鱔成魚(yú)MEF2基因家族不同組織表達(dá)情況
    3.9 損傷實(shí)驗(yàn)MEF2基因家族表達(dá)情況及SDH酶染色結(jié)果
第四章 討論與分析
    4.1 黃鱔MEF2基因家族基因結(jié)構(gòu)討論與分析
    4.2 黃鱔MEF2基因家族骨骼肌不同發(fā)育階段表達(dá)情況討論與分析
    4.3 黃鱔MEF2基因家族成魚(yú)不同組織表達(dá)情況討論與分析
    4.4 黃鱔MEF2基因家族損傷試驗(yàn)中表達(dá)情況討論與分析
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介

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1 易潭;黃鱔MEF2基因家族克隆及其表達(dá)分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 司建民;鴨MEF2家族的克隆及組織表達(dá)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2883078