1981年在美國夏威夷地區(qū)的細(xì)角濱對蝦(Litopenaeus stylirostris)中首次發(fā)現(xiàn)的傳染性皮下及造血組織壞死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)是全球養(yǎng)殖對蝦疾病中的主要病原之一,IHHNV感染的野生和養(yǎng)殖對蝦同時(shí)也遍布世界各地,世界動物衛(wèi)生組織(World Organisation For Animal Health,OIE)將IHHNV收錄為甲殼類重要疫病之一(OIE 2015)。IHHNV隸屬于細(xì)小病毒科,濃核癥病毒亞科,短濃核癥病毒屬。IHHNV感染宿主范圍較廣,可感染世界各地的野生對蝦和養(yǎng)殖對蝦,感染的對蝦可通過水平或垂直傳播的方式傳染群體以及下一代仔蝦,對細(xì)角濱對蝦(Litopenaeus stylirostris)死亡率高達(dá)90%,同時(shí)可引起凡納濱對蝦(L.vannamei)、斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)、日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)等生長緩慢,患上慢性矮小殘缺綜合癥(runt deformity syndrome,RDS),造成對蝦生長參差不齊。IHHNV是對蝦病毒中最小的病毒,病毒粒子大小僅20-22nm,無囊膜二十面體�；蚪M全長約4.1kb,其中包含3個(gè)閱讀框,分別為ORF1、ORF2、0RF3,分別編碼非結(jié)構(gòu)蛋白1(NS-1)、非結(jié)構(gòu)蛋白(NS-2)和核衣殼蛋白(CP)。目前Genebank中已收錄了部分地區(qū)的分離株,包括夏威夷分離株(AF21266)、厄瓜多爾分離株(AY362548)、加利福尼亞分離株(AF273215)、中國福建分離株(EF633688)、中國臺灣分離株(AY355306、AY355307、AY355307)和泰國分離株(AY362547)等。目前已發(fā)現(xiàn)IHHNV有兩種基因型,即感染型(type1和type2)和非感染型(type 3A和type3B),其中非感染型屬于IHHNV嵌入對蝦基因組的情況,該類型可使對蝦攜帶病毒但無致病性和致死性。針對不同的基因型,OIE推薦了5對引物(389F/R、392F/R、77012F/77353R、309F/R和MG831F/R)分別用于檢測不同基因型的IHHNV。目前我國對于IHHNV的研究還是不夠成熟,關(guān)于IHHNV研究的相關(guān)報(bào)道較少,起步比較晚。而國外起步較早,研究的相對完善。尤其對于目前階段IHHNV在國內(nèi)的對蝦養(yǎng)殖模式中的流行情況及危害程度僅局限于病毒攜帶率,而沒有IHHNV的感染力和致病性等缺乏相關(guān)數(shù)據(jù),其次也沒有病毒載量與體長關(guān)系的相關(guān)分析數(shù)據(jù)。本研究是通過人工感染凡納濱對蝦仔蝦和自然狀態(tài)下感染凡納濱對蝦的兩種感染方式,分析其致病力;通過普通PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對凡納濱對蝦進(jìn)行檢測,分析其病毒拷貝數(shù),分析病毒載量與體長相關(guān)性。從而了解國內(nèi)IHHNV感染流行情況。本研究的主要內(nèi)容包括:1.IHHNV人工感染凡納濱對蝦仔蝦IHHNV能夠感染多種對蝦,對幼蝦危害最為明顯,目前沒有更好的防治方法。該病毒可以使凡納濱仔蝦生長緩慢,導(dǎo)致生長規(guī)格參差不齊,產(chǎn)量嚴(yán)重下降,損失嚴(yán)重。本文模擬養(yǎng)殖廠的養(yǎng)殖模式進(jìn)行人工感染凡納濱對蝦仔蝦,然后將感染型IHHNV對蝦病料梯度稀釋后,通過投喂的方式對健康仔蝦進(jìn)行人工感染。觀察記錄仔蝦的死亡和體長變化。結(jié)果顯示:IHHNV對凡納濱對蝦仔蝦的感染率很高,在人工感染24天后開始出現(xiàn)明顯死亡,死亡率保持在20.28%-44.25%,40天之后死亡率處于穩(wěn)定狀態(tài),而不同病原之間沒有顯著性差異;在人工感染后16-44天之間使凡納濱仔蝦體長下調(diào)0.74-0.80cm。為IHHNV致病力的研究提供宏觀的參考。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測人工感染凡納濱對蝦仔蝦實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法因其檢測靈敏度高、精確性好、便捷等因素,在對蝦病毒檢測中應(yīng)用越來越廣泛。本文根據(jù)OIE推薦的引物、探針、體系、程序等進(jìn)行人工感染凡納濱對蝦仔蝦的檢測。人工感染12d內(nèi),凡納濱對蝦仔蝦體內(nèi)病毒拷貝處于上升趨勢,攻毒后兩天各組之間IHHNV病毒體內(nèi)拷貝數(shù)在103左右,當(dāng)?shù)?2天時(shí)IHHNV病毒濃度最高拷貝數(shù)達(dá)到最大7.91×104 copies/μg DNA,12d-14d拷貝數(shù)開始下降,14d之后各組的IHHNV病毒拷貝保持穩(wěn)定。3.IHHNV、EHP混合感染凡納濱對蝦的PCR檢測2013年,河北、天津等地區(qū)養(yǎng)殖的凡納濱對蝦育苗期出現(xiàn)死苗、出苗率低的情況,生產(chǎn)上仔蝦個(gè)體大小差異較大,造成了嚴(yán)重?fù)p失。本文采用熒光定量PCR(Real-time PCR)方法對天津大港地區(qū)采集的108尾凡納濱對蝦仔蝦樣品進(jìn)行單尾病原檢測。結(jié)果顯示:傳染性皮下及造血組織壞死病毒和蝦肝腸胞蟲均有檢出,IHHNV陽性檢出率100%。每微克對蝦組織DNA的病毒拷貝數(shù)在103~107之間,且個(gè)體較大的樣品(1.2~2.0cm)攜帶病毒拷貝數(shù)整體偏高;EHP陽性檢出率為49.1%,每微克對蝦組織DNA的拷貝數(shù)在103~105之間,且集中于個(gè)體較小樣品(0.7~1.1cm)。對IHHNV和EHP陽性凡納濱對蝦樣品進(jìn)行生物學(xué)體長與病毒載量指數(shù)相關(guān)性分析顯示,IHHNV載量指數(shù)與對蝦生長速率呈正相關(guān)關(guān)系,蝦組織IHHNV平均載量達(dá)到8.51×104copies/μg DNA,為較高的感染水平;EHP的載量與對蝦生長速率呈負(fù)相關(guān)性關(guān)系,與較大個(gè)體陽性檢出率較低相對應(yīng),蝦組織EHP平均載量達(dá)到2.19×104copies/μg DNA,為較高的感染水平。由此,該批凡納濱對蝦仔蝦患病及損失為IHHNV和EHP的混合感染所致,本文數(shù)據(jù)為IHHNV和EHP病原混合感染流行情況及其對養(yǎng)殖育苗期仔蝦生長的影響提供科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S945.49
【部分圖文】：

2.3 結(jié)果2.3.1 病料病毒含量根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測結(jié)果可知：深圳病原和阿根廷病原中病毒含量最高組（A 組）的病毒含量分別為 6.63×105copies/μg DNA 和 9.17×105copies/μg DNA，最低分別為 2.87×104copies/μg DNA 和 1.94×104copies/μg DNA，各組之間不是呈準(zhǔn)確的 10 倍梯度，存在一定的誤差。此為阿根廷病原的初始病毒含量要高于深圳病原。如表 2-3，圖 2-1。表 2-3 病料 IHHNV 病毒拷貝數(shù)（copies/μg DNA）Table 2-3. Number of diseased IHHNV virus （copy copies/μg DNA）A B C D E廣東阿根廷6.63E+059.17E+051.39E+051.03E+056.32E+046.32E+043.06E+042.87E+042.87E+041.94E+04

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文圖 2-3 阿根廷病原存活率變化Fig 2-3 Argentine change map pathogen survival00.20.40.60.811.20 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52阿根廷A阿根廷B阿根廷C阿根廷D阿根廷E陰性對照空白對照仔蝦存活率%/攻毒后養(yǎng)殖天數(shù)/天

圖 2-7 養(yǎng)殖后期出現(xiàn)生長不齊Fig 2-7 Late growth appeared to grow討論本章同過人工感染凡納濱仔蝦，分析感染后存活率和體長變化，同時(shí)進(jìn)行阿根廷毒株與中國毒株的差異性分析，從宏觀分析了 IHHNV 及不同毒株對凡納濱仔蝦的致病力。傳染性皮下及造血組織壞死病毒（IHHNV）是對蝦最重要的病源之一，對我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)也影響我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。1992 年我國養(yǎng)殖對蝦出現(xiàn)由白斑綜合征病毒（WSSV）引起的爆發(fā)性流行病，給我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成毀滅性打擊。90 年代中后期，隨著凡納濱對蝦的引入，對蝦病原也呈現(xiàn)多樣性。本實(shí)驗(yàn)是在對凡納濱仔蝦、陰性樣品親蝦、陽性樣品親蝦進(jìn)行普通 PCR 檢測 WSSV、IHHNV、EHP、AHPND 四種病原都符合實(shí)驗(yàn)條件的前提下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的，保證了實(shí)驗(yàn)凡納濱仔蝦和陰性樣品都不帶病原，人工感染樣品只帶 IHHNV。在制備病料過程中都是在冰上操作，而且各組之間嚴(yán)格防止交叉污染。對制備好的病料進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測，結(jié)果顯示各濃度之間的梯度不是特別明顯，主要是在制備過程中存在誤差，其中 D 組和 E 組誤差比較大，梯度2.4
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林惠山;戚雋淵;喬燕平;;凡納濱對蝦高產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)優(yōu)化技術(shù)探討[J];水產(chǎn)科技情報(bào);2006年04期

2 衣萌萌;于赫男;林小濤;許忠能;周小壯;;密度脅迫下凡納濱對蝦的行為與生理變化[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2012年01期

3 周歧存,丁燏,鄭石軒,蘇樹峰,張磊;維生素C對凡納濱對蝦生長及抗病力的影響[J];水生生物學(xué)報(bào);2004年06期

4 楊奇慧,周歧存;凡納濱對蝦營養(yǎng)需要研究進(jìn)展[J];飼料研究;2005年06期

5 楊奇慧,周歧存;凡納濱對蝦營養(yǎng)需要研究進(jìn)展(續(xù))[J];飼料研究;2005年07期

6 江湧,王廣軍 ,余德光;中草藥添加劑對凡納濱對蝦生長和抗病力影響的研究[J];漁業(yè)現(xiàn)代化;2005年04期

7 羅杰,鐘志華,羅偉林;凡納濱對蝦(Litopenaeus Vannamei)高位池養(yǎng)殖中幾個(gè)單項(xiàng)因子試驗(yàn)[J];海洋湖沼通報(bào);2005年03期

8 張才學(xué),黎運(yùn)積;凡納濱對蝦生態(tài)養(yǎng)殖新方法的研究[J];海洋科學(xué);2005年09期

9 陳涵貞;陳人弼;羅欽;陳衛(wèi)偉;;火焰原子吸收光譜法測定凡納濱對蝦中的鎘[J];福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2005年S1期

10 吳任;謝數(shù)濤;孫勇;完顏小青;張其中;;凡納濱對蝦熱休克蛋白70的原核高效表達(dá)[J];中國水產(chǎn)科學(xué);2006年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 朱素芹;冷藏凡納濱對蝦特定腐敗菌群體感應(yīng)現(xiàn)象與致腐能力的研究[D];中國海洋大學(xué);2015年

2 沙玉杰;乳酸菌對凡納濱對蝦益生機(jī)理的研究[D];中國科學(xué)院研究生院(海洋研究所);2016年

3 劉曉華;谷胱甘肽對凡納濱對蝦抗氧化防御的調(diào)控機(jī)理[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 李喜蓮;凡納濱對蝦肌肉組織中體重調(diào)控相關(guān)基因的篩選、克隆鑒定及功能研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

5 張健;免疫增強(qiáng)劑對凡納濱對蝦幼蝦生長、免疫及抗應(yīng)激的影響[D];中山大學(xué);2012年

6 羅展;凡納濱對蝦兩種C-型凝集素的基因克隆和功能研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2010年

7 胡毅;凡納濱對蝦飼料配方優(yōu)化及幾種飼料添加劑的應(yīng)用[D];中國海洋大學(xué);2007年

8 于赫男;環(huán)境脅迫對羅氏沼蝦和凡納濱對蝦行為、生長及生理活動的影響[D];暨南大學(xué);2007年

9 郭彪;光照和溫度波動對凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）蛻皮和生長的影響及機(jī)制的初步研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

10 侯純強(qiáng);水中鈣濃度對凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）蛻皮和生長的影響及生理生態(tài)學(xué)機(jī)制[D];中國海洋大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林建偉;基于氨基酸平衡的雞肉粉替代魚粉的配合飼料對凡納濱對蝦生長性能的影響[D];集美大學(xué);2015年

2 陳庭;雞肉粉替代魚粉飼料中添加包被氨基酸對凡納濱對蝦生長的影響[D];集美大學(xué);2015年

3 齊飛;四種物質(zhì)對凡納濱對蝦利用植物蛋白的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 陳詩妍;凡納濱對蝦死后胰蛋白酶的遷移及其對肌肉蛋白的降解作用[D];廣東海洋大學(xué);2015年

5 殷桂芳;噁喹酸在凡納濱對蝦體內(nèi)藥動學(xué)及對弧菌的體外藥效學(xué)[D];上海海洋大學(xué);2015年

6 劉軍;凡納濱對蝦溫棚高位池養(yǎng)殖密度及簡易水質(zhì)調(diào)控措施研究[D];上海海洋大學(xué);2015年

7 劉珍;蝦肝腸胞蟲實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)的建立及其與對蝦生長相關(guān)性的研究[D];上海海洋大學(xué);2015年

8 王剛;凡納濱對蝦免疫基因克隆與合并感染條件下的免疫應(yīng)答[D];廣東海洋大學(xué);2015年

9 胡志國;凡納濱對蝦選育基礎(chǔ)群體的建立及生長性狀遺傳參數(shù)的估計(jì)[D];廣東海洋大學(xué);2015年

10 張海濤;鋅源、鋅水平對凡納濱對蝦生長性能、生化和免疫指標(biāo)及組織鋅含量的影響[D];廣東海洋大學(xué);2015年

本文編號：2870957