日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)俗稱河蝦或青蝦,是一種重要的淡水養(yǎng)殖蝦類。其適應(yīng)能力強(qiáng),食性雜,繁殖力強(qiáng),廣泛分布于我國(guó)大小水域,是我國(guó)重要的養(yǎng)殖蝦類之一。河蝦肉質(zhì)鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,在我國(guó)水產(chǎn)品市場(chǎng)廣受歡迎。但隨著現(xiàn)代工業(yè)化進(jìn)程的迅速發(fā)展,各地水域水質(zhì)均受到不同程度破壞,加上養(yǎng)殖業(yè)自身發(fā)展的不健康和不規(guī)范,進(jìn)一步加劇了養(yǎng)殖水域水環(huán)境的惡化,導(dǎo)致包括河蝦在內(nèi)的咸淡水經(jīng)濟(jì)蝦類養(yǎng)殖受多種疾病困擾,而研究河蝦先天免疫防御機(jī)制,可以對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中的疾病防控進(jìn)行有效指導(dǎo)。模式識(shí)別受體和免疫信號(hào)途徑作為無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在無(wú)脊椎動(dòng)物對(duì)抗病原微生物感染過(guò)程發(fā)揮重要作用。本論文首先對(duì)日本沼蝦Hippo信號(hào)通路中Mats基因進(jìn)行了研究。Yorkie是Hippo信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄因子,促進(jìn)Cactus基因(Toll信號(hào)通路)的表達(dá)。而Yorkie作為轉(zhuǎn)錄因子,行使功能時(shí),需要與其它蛋白進(jìn)行互作,Taiman是Yokie的一種互作蛋白,在該論文中,我們對(duì)Taiman基因的選擇性剪切以及在免疫防御中的功能進(jìn)行了初步研究。最后,我們對(duì)發(fā)現(xiàn)的一種高變C-型凝集素(在編碼區(qū),通過(guò)含有不同數(shù)目的重復(fù)單元,增加凝集素多樣性)的功能進(jìn)行了初步研究。1.MnMats基因在日本沼蝦先天免疫中的功能在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)并命名了MnMats基因,獲得了其cDNA序列,cDNA全長(zhǎng)為1127bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)大小為651bp,編碼217個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的蛋白,含有一個(gè)Mob1_phocein結(jié)構(gòu)域。我們研究了其在日本沼蝦中的組織分布情況,發(fā)現(xiàn)其在各個(gè)組織中均有分布,肝胰腺中表達(dá)量最大,而血細(xì)胞中最低。我們進(jìn)一步研究了其在金黃色葡萄球菌/副溶血弧菌刺激時(shí)的表達(dá)模式,發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌刺激時(shí),除血細(xì)胞和胃以外,各個(gè)組織MnMats均呈上調(diào)趨勢(shì)。而當(dāng)機(jī)體面對(duì)副溶血弧菌刺激時(shí),除胃以外其他組織中MnMats也均上調(diào)。RNAi敲低MnMats后,發(fā)現(xiàn)多種抗菌肽表達(dá)受到了抑制。這些研究結(jié)果表明,作為Hippo信號(hào)通路中的重要組件,MnMats基因可能通過(guò)抑制Cactus基因的表達(dá),促進(jìn)抗菌肽的表達(dá),從而參與了日本沼蝦先天免疫防御。2.MnTaiman基因在日本沼蝦先天免疫中的功能我們?cè)谌毡菊游r中發(fā)現(xiàn)并命名了MnTaiman基因。日本沼蝦Taiman基因存在四種不同的轉(zhuǎn)錄本。其中最長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本cDNA全長(zhǎng)為6894 bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)全長(zhǎng)為4998 bp,編碼長(zhǎng)度為1666個(gè)氨基酸的蛋白。含有一個(gè)PAS結(jié)構(gòu)域、一個(gè)HLH結(jié)構(gòu)域和一個(gè)PAS_11結(jié)構(gòu)域。半定量進(jìn)行組織分布研究時(shí),發(fā)現(xiàn)MnTaiman基因C末端存在選擇性剪切,產(chǎn)生四種不同的剪切本,命名為TaiA、TaiB、TaiC、TaiD。qRT-PCR結(jié)果表明,MnTai-Total(TaiT)、TaiA、TaiB、及TaiD的組織分布相似,在各個(gè)組織中均有分布,并且在肝胰腺中高表達(dá)。但TaiC在胃組織中高表達(dá)。金黃色葡萄球菌/副溶血弧菌刺激下的表達(dá)模式實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,除血細(xì)胞之外,在其他組織中TaiT及四種轉(zhuǎn)錄本呈現(xiàn)不同的表達(dá)模式。在血細(xì)胞中,病原刺激后基因均呈下調(diào)趨勢(shì)。在河蝦血細(xì)胞中,RNA干擾敲低MnTaiman,金葡萄球菌刺激后24h,ALF1表達(dá)顯著增高。MnTaiman敲低后,副溶血弧菌刺激后24h,ALF1表達(dá)也明顯上調(diào)。根據(jù)已有文獻(xiàn),Taiman和Yorkie互作,而Yorkie調(diào)節(jié)Cactus的表達(dá)。所以我們推測(cè),MnTaiman通過(guò)調(diào)控Cactus的表達(dá),負(fù)調(diào)控Toll信號(hào)通路,從而抑制抗菌肽基因的表達(dá)。3.一種高變C-型凝集素功能研究我們?cè)谌毡菊游r中發(fā)現(xiàn)一種C-型凝集素,由于其編碼區(qū)含有不同數(shù)目的重復(fù)單元,因此,我們命名為repeat lectin-MnRlec。該蛋白含有一個(gè)信號(hào)肽、一個(gè)CLECT結(jié)構(gòu)域,在這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間包含一個(gè)含有不同數(shù)目重復(fù)單元的區(qū)域,該區(qū)域含有的串聯(lián)重復(fù)可以高達(dá)9個(gè),最少含有一個(gè)串聯(lián)重復(fù)。在基因組上,我們也發(fā)現(xiàn)了含有不同數(shù)目重復(fù)單元的序列,因此我們推測(cè),含有不同數(shù)目重復(fù)單元的凝集素,在基因組復(fù)制過(guò)程中,發(fā)生了滑動(dòng)錯(cuò)配,導(dǎo)致基因多樣性的產(chǎn)生。我們表達(dá)和純化了三種分別含有1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)串聯(lián)重復(fù)單元的MnRlec蛋白,命名為MnRlec1、MnRlec2、MnRlec3。對(duì)這三種蛋白進(jìn)行細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)MnRlec1對(duì)副溶血弧菌的結(jié)合呈現(xiàn)出鈣離子依賴的特征,MnRlec2和MnRlec3對(duì)副溶血弧菌的結(jié)合能力減弱。此外,MnRlec1、MnRlec2以及MnRlec3均表現(xiàn)出對(duì)大腸桿菌的結(jié)合能力,且這種結(jié)合不依賴于鈣離子。通過(guò)我們的研究發(fā)現(xiàn),MnRlec隨著重復(fù)單元的增加,結(jié)合副溶血弧菌的能力減弱,這可能是病原和宿主在進(jìn)化過(guò)程中進(jìn)行博弈的結(jié)果。
【學(xué)位單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

設(shè)計(jì)特異引物，以日本沼蝦的各個(gè)組織 cDNA（血、心、為模板，使用常規(guī) PCR 擴(kuò)增獲得的四種剪切本的電泳圖。ith gene-specific primers, we gain the four different splicing trTaiA-TaiD) using RT-PCR methods. The cDNA from hemocyts, gills, stomach and intestine of M. nipponense were used as an 的四種剪切體（TaiA、TaiB 、TaiC 和 TaiD）模式圖。五個(gè)外顯子的長(zhǎng)度。

圖 3.2. 通過(guò)設(shè)計(jì)特異引物，以日本沼蝦的各個(gè)組織 cDNA（血、心、肝、鰓、胃和腸）為模板，使用常規(guī) PCR 擴(kuò)增獲得的四種剪切本的電泳圖。Fig.3.2. With gene-specific primers, we gain the four different splicing transcripts ofMnTaiman (TaiA-TaiD) using RT-PCR methods. The cDNA from hemocytes, heart,hepatopancreas, gills, stomach and intestine of M. nipponense were used as templates.

atgattgatcaggagatatataaataaaatttgactcagttaaattacaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa圖.4.1. （A） 日本沼蝦 MnRlec 的 cDNA 序列和預(yù)測(cè)的氨基酸序列。圖中灰色陰影部分為 CLEC 結(jié)構(gòu)域，劃線部分為信號(hào)肽（Signal peptide），彩色陰影表示 6 個(gè)短串聯(lián)重復(fù)單元

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 溫周瑞;謝平;;太湖日本沼蝦的生長(zhǎng)特性[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年18期

2 侯冠軍;石殿軍;程云生;;淮河流域河溝型水體套養(yǎng)日本沼蝦的效果評(píng)價(jià)[J];中國(guó)水產(chǎn);2013年02期

3 范武江;曹翔德;李雪松;蔣亞根;;日本沼蝦土池高效育苗試驗(yàn)[J];科學(xué)養(yǎng)魚(yú);2013年11期

4 孫秀娟;王敏;王雪鵬;丁雷;;日本沼蝦常見(jiàn)疾病及防治技術(shù)[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年10期

5 張水波;;日本沼蝦的網(wǎng)箱養(yǎng)殖[J];水產(chǎn)養(yǎng)殖;2009年07期

6 江輝;李大高;向國(guó)榮;;日本沼蝦的人工養(yǎng)殖(上)[J];湖南農(nóng)業(yè);2009年07期

7 蔣速飛;傅洪拓;熊貽偉;吳滟;龔永生;何新龍;;日本沼蝦4個(gè)地理群體遺傳變異的RAPD分析[J];長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)農(nóng)學(xué)卷;2006年02期

8 蔣速飛;傅洪拓;熊貽偉;吳滟;龔永生;何新龍;;日本沼蝦4個(gè)地理群體遺傳變異的RAPD分析[J];長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版);2006年05期

9 汪財(cái)生;尹尚軍;錢國(guó)英;朱秋華;;日本沼蝦染色體倍性檢測(cè)技術(shù)的研究[J];海洋科學(xué);2006年07期

10 吳惠仙,薛俊增,俞宏;日本沼蝦常見(jiàn)疾病與防治[J];淡水漁業(yè);2002年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 喬慧;張禹寧;張文宜;熊貽偉;蔣速飛;傅洪拓;;日本沼蝦雌蝦繁殖調(diào)控的比較轉(zhuǎn)錄組分析[A];2018年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2018年

2 顧夕章;楊明;傅洪拓;孫盛明;喬慧;張文宜;蔣速飛;熊怡偉;金舒博;龔永生;吳滟;;飼料中添加不同水平膽固醇對(duì)日本沼蝦生長(zhǎng)、飼料利用、體組成及免疫指標(biāo)的影響[A];2017年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2017年

3 馮建彬;吳春林;姜虎成;李家樂(lè);;江蘇主要湖泊日本沼蝦遺傳多樣性及系統(tǒng)進(jìn)化分析[A];中國(guó)甲殼動(dòng)物學(xué)會(huì)第十一屆年會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

4 李彥芹;薛嵐;徐珊珊;彭冬青;管越強(qiáng);康現(xiàn)江;;一株光合細(xì)菌特性及其對(duì)日本沼蝦免疫和消化作用的影響[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)、中國(guó)海洋與湖沼學(xué)會(huì)甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)2004年甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2004年

5 胡宇寧;傅洪拓;喬慧;孫盛明;金舒博;ZHANG Wenyi;;日本沼蝦熒光定量?jī)?nèi)參基因的評(píng)估與驗(yàn)證[A];2018年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2018年

6 李秀;張鳳英;蔣科技;趙衛(wèi)紅;趙明;宋煒;馬凌波;;雙酚A暴露對(duì)日本沼蝦5個(gè)卵巢發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響[A];2017年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2017年

7 汪桂玲;蘇翔;朱琴;馮建彬;李家樂(lè);;贛江水系日本沼蝦18個(gè)群體遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析[A];全國(guó)生物遺傳多樣性高峰論壇會(huì)刊[C];2012年

8 趙艷民;趙云龍;;日本沼蝦胚胎發(fā)育過(guò)程中主要生化物質(zhì)含量的變化[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)、中國(guó)海洋與湖沼學(xué)會(huì)甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)2004年甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2004年

9 趙衛(wèi)紅;陳立僑;張鳳英;吳萍;;日本沼蝦組蛋白酶L在卵巢發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)[A];中國(guó)甲殼動(dòng)物學(xué)會(huì)第十一屆年會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

10 謝松;李志華;王軍霞;;饑餓對(duì)日本沼蝦生長(zhǎng)和部分消化酶的影響[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)、中國(guó)海洋與湖沼學(xué)會(huì)甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)2004年甲殼動(dòng)物學(xué)分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 建新;日本沼蝦的活體運(yùn)輸[N];河南科技報(bào);2002年

2 浙江省德清縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站;日本沼蝦九病防治[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2013年

3 廣東省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站 姚國(guó)成站長(zhǎng);特產(chǎn)淡水蝦類之一——日本沼蝦[N];廣東科技報(bào);2003年

4 本報(bào)記者 戚文;海洋經(jīng)濟(jì)總產(chǎn)值創(chuàng)新高[N];丹東日?qǐng)?bào);2008年

5 李軍;養(yǎng)殖特種水平 須防自相殘殺[N];中國(guó)特產(chǎn)報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 于杰倫;日本沼蝦免疫應(yīng)答相關(guān)基因的篩選與鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

2 金舒博;日本沼蝦促雄腺文庫(kù)構(gòu)建及性別相關(guān)功能基因研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 吳惠仙;生物防治用途芽孢桿菌對(duì)水產(chǎn)條件致病菌抑制作用與對(duì)中華絨螯蟹、日本沼蝦及中華鱉保護(hù)效果的評(píng)價(jià)[D];浙江大學(xué);2005年

4 趙衛(wèi)紅;日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）卵黃蛋白原代謝相關(guān)基因的克隆和表達(dá)研究[D];華東師范大學(xué);2011年

5 孔有琴;日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）幼蝦的銅營(yíng)養(yǎng)生理研究[D];華東師范大學(xué);2014年

6 江紅霞;日本沼蝦雌性性早熟相關(guān)基因的篩選、克隆、表達(dá)與功能分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2017年

7 張鳳英;日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）卵子和胚胎發(fā)育相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究[D];華東師范大學(xué);2011年

8 吳萍;日本沼蝦卵巢表達(dá)序列標(biāo)簽分析及生殖相關(guān)基因的克隆與表達(dá)[D];華東師范大學(xué);2009年

9 葛少欽;十足目甲殼動(dòng)物精子發(fā)生及頂體反應(yīng)過(guò)程中堿性蛋白和乙�；疕4蛋白的變化[D];河北大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 邵虎明;日本沼蝦原肌球蛋白的分離鑒定及致敏性分析[D];南昌大學(xué);2019年

2 麻福通;MnMats，MnTaiman及一種高變C-型凝集素在日本沼蝦先天免疫中的功能研究[D];南京師范大學(xué);2019年

3 羅歡;日本沼蝦α2-巨球蛋白和低密度脂蛋白相關(guān)受體-1基因的分子克隆及其功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

4 趙碩;日本沼蝦銜接蛋白Syntenin和ADP核糖基化因子2基因的分子克隆及其表達(dá)分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

5 孫鶴鶴;日本沼蝦SVWC參與抗菌免疫反應(yīng)[D];河北大學(xué);2019年

6 黃亞龍;KK-42對(duì)日本沼蝦3個(gè)幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白基因表達(dá)的影響[D];河南師范大學(xué);2018年

7 鄭征帆;KK-42對(duì)3個(gè)日本沼蝦表皮CBPs上調(diào)作用研究[D];河南師范大學(xué);2018年

8 苗澤龍;日本沼蝦CBPs基因的克隆及KK-42對(duì)其表達(dá)的誘導(dǎo)效應(yīng)[D];河南師范大學(xué);2018年

9 王志;磷脂對(duì)日本沼蝦飼料適宜脂肪水平和能量蛋白比影響的研究[D];蘇州大學(xué);2018年

10 李婷婷;Ficolin-like、Toll和IMD在日本沼蝦先天免疫中的功能研究[D];南京師范大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2815303