【摘要】：目前,羅非魚是世界第三重要養(yǎng)殖魚類,其養(yǎng)殖產(chǎn)量預(yù)計(jì)于2025年達(dá)世界水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量的六成。無(wú)乳鏈球菌(Group B Streptococcus,GBS)是危害羅非魚養(yǎng)殖的重要細(xì)菌性病原之一,GBS可造成羅非魚患嚴(yán)重疾病,故GBS病是我國(guó)亟需凈化水生動(dòng)物第三類疾病。目前,羅非魚GBS病的應(yīng)用研究已得到足夠重視和支持,也取得了一定成果,頭腎是魚類重要的免疫造血器官,也是GBS主要侵襲的部位。然而,對(duì)GBS對(duì)頭腎造成的病理?yè)p傷鮮有報(bào)道。因此本論文對(duì)感染GBS羅非魚的頭腎開展動(dòng)態(tài)病理?yè)p傷研究,以期豐富羅非魚鏈球菌病的基礎(chǔ)研究,為后續(xù)的應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ),本研究選用(250±10)g健康吉富羅非魚20尾,對(duì)頭腎進(jìn)行大體、組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)觀察;160尾,隨機(jī)分為5組,使用劑量為1.0×10~7 cfu GBS對(duì)羅非魚進(jìn)行攻毒,于注射GBS后第0、4、8、24和72 h采集頭腎。用光鏡、電鏡技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和SABC免疫組化染色等方法研究頭腎正常結(jié)構(gòu)和GBS動(dòng)態(tài)分布規(guī)律,建立病理評(píng)分體系,對(duì)感染進(jìn)行分期,探討GBS量對(duì)各頭腎病理分期的影響,為揭示頭腎病理?yè)p傷機(jī)制和GBS的致病機(jī)制提供新思路。結(jié)果如下:1:羅非魚頭腎位于心腹腔隔膜背前方,分左右兩瓣,成年羅非魚頭腎組織內(nèi)無(wú)腎單位,組織學(xué)上,可分為2區(qū),中央?yún)^(qū)和外周區(qū),中央?yún)^(qū)由淋巴樣組織和血竇構(gòu)成,含黑色素巨噬細(xì)胞中心,淋巴組織排列成索狀,圍繞血管呈放射狀分布,淋巴索之間由血竇隔開,外周區(qū)則以彌散性淋巴組織為特征,血竇較少也較小,是典型的造血淋巴組織。2:感染無(wú)乳鏈球菌后,魚體大體動(dòng)態(tài)病理變化主要體現(xiàn)在內(nèi)臟器官的充血、出血、腫大,角膜渾濁和腦軟化,頭腎主要體現(xiàn)在顏色和頭腎體指數(shù),表現(xiàn)為0-4h,顏色變暗,4-24h,明顯腫大,顏色變暗,呈不同程度的紫紅色,24-72h,頭腎腫大和顏色變暗的程度雖比4-24h減輕,但仍然腫大和顏色變暗;頭腎體指數(shù)在攻毒后0-4h,極顯著增大,8-24h,顯著增大,24-72h,極顯著增大。主要的組織動(dòng)態(tài)病理學(xué)變化為:攻毒后4-8h,黑色素巨噬細(xì)胞中心數(shù)量明顯減少,體積縮小,成分少,著色淺,結(jié)構(gòu)松散,動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞脫落,開始出現(xiàn)炎性細(xì)胞邊移、貼壁;8-24h,數(shù)量減少甚至消失,僅存少量棕色顆粒,內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、脫落,中膜平滑肌變性、壞死,內(nèi)膜、中膜、外膜各層均有水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn),淋巴索排列紊亂,血竇淤血嚴(yán)重,血管通透性升高,血管旁出現(xiàn)均質(zhì)紅染的炎性滲出物和炎性細(xì)胞,24h時(shí),頭腎內(nèi)成團(tuán)聚集大量GBS,GBS表面有莢膜,在淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和紅細(xì)胞內(nèi)存活;24-72h,黑色素巨噬細(xì)胞中心大量增加,體積小,成分消失,不能著棕褐色或黑色顆粒,結(jié)構(gòu)松散呈空泡,間質(zhì)變成境界不清條團(tuán)狀無(wú)結(jié)構(gòu)紅染物質(zhì),淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞減少,充血嚴(yán)重,黑色素巨噬細(xì)胞中心壞死溶解,見(jiàn)大量壞死區(qū)。細(xì)胞主要的動(dòng)態(tài)病理變化為:攻毒后0-24h,活細(xì)胞數(shù)量無(wú)顯著差異;24-72h,活細(xì)胞數(shù)量極顯著減少,組織中細(xì)胞發(fā)生大量凋亡壞死。細(xì)菌在攻毒后4-8h,GBS量顯著增多,24-72h,GBS量極顯著增多。結(jié)合典型動(dòng)態(tài)病理變化和GBS含量,可診斷出感染1.0×10~7 cfu GBS的羅非魚頭腎患急性細(xì)菌性化膿性炎癥,病程分3期,反應(yīng)期(0-4h):大體正常,頭腎體指數(shù)增大,黑色素巨噬細(xì)胞中心和血管正常,無(wú)GBS,無(wú)壞死區(qū);緩滯期(4-8h):大體正常,頭腎體指數(shù)顯著增大,黑色素巨噬細(xì)胞中心和淋巴細(xì)胞減少,頭腎血管損傷,組織內(nèi)開始出現(xiàn)少量GBS,無(wú)壞死區(qū);危亡期(8-24h):魚體出現(xiàn)典型癥狀,頭腎體指數(shù)顯著增大,黑色素巨噬細(xì)胞中心和淋巴細(xì)胞減少,頭腎血竇內(nèi)大量紅細(xì)胞充盈、淤血,有大量炎性滲出和GBS,無(wú)壞死區(qū);危亡期(24-72h):魚體出現(xiàn)典型癥狀,頭腎體指數(shù)顯著增大,黑色素巨噬細(xì)胞中心增多,充血,有大量GBS,有壞死區(qū)。綜上:GBS感染吉富羅非魚后,頭腎結(jié)構(gòu)受到明顯損傷,過(guò)度炎癥反應(yīng)可能是導(dǎo)致魚體急性死亡的重要原因。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S943
【圖文】：

2.1 頭腎的解剖結(jié)構(gòu)觀察頭腎的解剖位置：取10尾健康羅非魚，剖解前用0.1g/LMS-222麻醉，死后置于冰上。將5尾羅非魚左側(cè)平放（圖2-1a），從肛門前端起剪，斜向上至側(cè)線，再沿側(cè)線下方剪至胸鰭上方，接著斜向下剪至圍心腔前端（圖2-1b），暴露羅非魚腹腔，觀察頭腎位置。同時(shí)，將5尾羅非魚右側(cè)平放，按相同方式解剖，觀察頭腎位置。圖2-1 羅非魚解剖過(guò)程Figure 2-1Anatomical procedure頭腎的形態(tài)觀察：將頭腎暴露后，觀察頭腎的形態(tài)和顏色，再沿著體腔壁小心分離出組織，剔除周圍脂肪，并用PBS洗滌表面血液

3 結(jié)果3.1 大體位置羅非魚沿左側(cè)剖開后，可見(jiàn)腸道和肝臟充滿整個(gè)腹腔（圖2-2a），取除整個(gè)腹腔內(nèi)容物后，可見(jiàn)頭腎位于腎臟最前端，頭部后方，圍心腹腔隔膜背前方，顏色偏暗紅，與體腎連接，呈典型Y字形，沿體柱向后延伸（圖2-2b），羅非魚頭腎左右各一，對(duì)稱分布，分為2葉，被膜光滑，30g-360g健康羅非魚頭腎的絕對(duì)重量為（0.0327-0.822g）

血竇的大小和形狀不規(guī)則。外周區(qū)則以淋巴細(xì)胞排列密集的彌散性淋巴組織為特征，血竇較少也較小。表面有一層膠原纖維結(jié)締組織性薄膜，膠原纖維成束平行排列，邊緣部分細(xì)胞密度大且細(xì)胞間隙小（圖2-3 B）。圖2-3 羅非魚頭腎分區(qū) H&E染色圖A.頭腎橫切面。分為2區(qū)：1.中央?yún)^(qū)，2.外周區(qū)；B. 3.被膜。

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本文編號(hào)：2784159