【摘要】：急性肝胰腺壞死合綜合癥(Acute hepatopancreas necrosis syndrome,AHPNS)是近年來影響凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要疾病之一。2009年以來,AHPNS使得亞洲對蝦產量大幅下降,給亞洲養(yǎng)蝦業(yè)帶來了巨大的經濟損失,我國以凡納濱對蝦養(yǎng)殖為主的對蝦養(yǎng)殖業(yè)亦受到較大沖擊。2013年,全球水產養(yǎng)殖聯(lián)盟(Global Aquaculture Alliance,GAA)發(fā)表聲明,明確了AHPNS的病原體是副溶血弧菌。據報道,該病原菌通過效應蛋白PirA與PirB產生毒力,病蝦消化器官顏色蒼白,肝胰腺萎縮,空腸空胃,發(fā)病1~3天內死亡率可達到100%。目前對于AHPNS的致病機理尚未研究清楚,尚無有效的防治手段見諸報道。本文通過分離得到了不同來源的凡納濱對蝦AHPNS致病菌,進行了分子分型,獲得江蘇地區(qū)急性肝胰腺壞死綜合癥的分子流行病學資料;通過致病性弧菌拮抗菌的篩選相關研究,為該病的生態(tài)防控提供技術資料。2017~2018年間,江蘇省沿海地區(qū)連云港、鹽城和南通等市部分養(yǎng)殖場出現(xiàn)不同程度的凡納濱對蝦急性死亡,發(fā)病對蝦呈現(xiàn)為空腸空胃,肝胰胰萎縮或腫漲,表現(xiàn)出AHPNS發(fā)病的典型癥狀。從上述數十家養(yǎng)殖場采集不同苗種來源、不同生長階段、不同發(fā)病特點以及不同養(yǎng)殖模式的健康和疑似患AHPNS的凡納濱對蝦,無菌解剖其肝胰腺,分離得到642株細菌,分別采用急性肝胰腺壞死合綜合癥致病性相關基因pirA~(vp)引物AP3以及細菌16S rRNA通用引物進行擴增,確認并獲得28株凡納濱對蝦AHPNS致病性副溶血弧菌,根據不同的來源、模式等對所得菌株進行了分類。應用脈沖場電泳(PFGE)技術,對28株分離自江蘇省內不同地區(qū)、不同養(yǎng)殖模式、不同生長階段的對蝦AHPNS發(fā)病個體肝胰腺的致病性副溶血弧菌進行分子分型研究,最終得到了副溶血弧菌的4個主要的PFGE簇(G 1-G4),24個譜型,帶型間相似性達到86.1%-100%,表明各菌株親源關系較近,PFGE的分型結果與樣品來源的生長地點、養(yǎng)殖模式、發(fā)病癥狀、苗種來源、對蝦生長階段等具有相關性,說明在江蘇省內由副溶血弧菌引起的凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死綜合癥的發(fā)生已經存在流行趨勢。4個不同PFGE聚類簇的譜型存在一定的差異,這與28株菌的來源、養(yǎng)殖模式、發(fā)病癥狀以及發(fā)病對蝦不同生長階段有關。本研究初步建立了江蘇省內凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死癥弧菌的PFGE數據資料,以便在預警防控過程中快速將不同發(fā)病樣品或可疑對蝦樣品的副溶血性弧菌PFGE譜帶與本研究結果進行比較。根據同一來源對蝦個體具有共同的遺傳物質,在PFGE譜帶中表現(xiàn)出相同的指紋圖譜這一原理,分析菌株間的親緣關系,研究某疾病的傳染源、流行范圍等,并在此基礎上進行疾病的預警預控,采取有效措施防控凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死綜合癥。從江蘇南部沿海灘涂沉積物中分離得到252株細菌,以14株凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死癥致病性副溶血弧菌為指示菌,初篩和復篩后,獲得1株拮抗效果較好的菌株H 0011;通過形態(tài)觀察、生理生化特性和16S rRNA基因序列鑒定為普羅威登斯菌。利用普羅威登斯菌H 0011對凡納濱對蝦進行高密度脅迫安全性試驗結果,試驗期間浸浴組和投喂組對蝦狀態(tài)良好,沒有發(fā)病和死亡現(xiàn)象,該菌株對凡納濱對蝦是安全的。菌株H 0011的發(fā)酵工藝結果,該菌最佳發(fā)酵生長條件為溫度為30℃、鹽度為10‰、pH為8、培養(yǎng)時間為20 h。本文首次對江蘇地區(qū)不同苗種、不同地區(qū)、不同生長時期、不同養(yǎng)殖模式、不同死亡特點的凡納濱對蝦進行了AHPNS致病性弧菌收集及分子分型,認為江蘇省內凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死綜合癥已形成流行趨勢,為進一步開展江蘇地區(qū)急性肝胰腺壞死綜合癥的分子流行病學研究提供技術資料;首次獲得了對凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死癥具有防控作用的高效拮抗作用菌,為該病的防控提供了新的思路。
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S945.46
【圖文】：

上海海洋大學碩士學位論文云港、鹽城地區(qū)的幾十份對蝦樣品中分離純化至 642 株可疑致病細菌菌株。2.2.2AHPNS 病原菌的確認及鑒定通過 AP 3 擴增 642 株細菌菌株的 AP 3 序列，瓊脂糖凝膠電泳結果顯示，編號 H289 等 28 株菌株在 333 bp 大小處有明亮條帶（圖 2-1），與目標條帶大小一致。結果表明，這 28 株菌株為 AHPNS 的致病性細菌。

29圖 3-1 28 株副溶血弧菌 PFGE 分子分型結果Figure 3 28 Molecular Typing of Vibrio parahaemolyticus PFGE3.3.2 28 株副溶血弧菌 PFGE 簇不同地點的分布南通地區(qū)的菌株在各譜系中分布均衡，均有存在；鹽城地區(qū)以 G 4 PFGE 簇w 主（5/10），同時也較均勻分布于 G 1、G 2 和 G 3 PFGE 簇中；連云港地區(qū)菌株只有 2 株，以 G 1 為主，同源性 100 %。具體見表 3-1。

圖 4-1 基于 16S rDNA 序列的菌株 H0011 系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 4-1 Phylogenetic Tree of Strain H0011 Based on 16S rDNA Sequence4.1.6.3 安全性實驗通過高濃度脅迫實驗測試篩選菌株 H0011 的結果如表 4-3 所示。浸浴組1×108cfu/mL、1×109cfu/mL 條件下的凡納濱對蝦，在整個實驗過程中健康，且攝食正常又活力良好，無空腸和死亡現(xiàn)象；浸浴組 1×1010cfu/mL 的三個平行組中有一組對蝦出現(xiàn) 1 尾空腸現(xiàn)象。投喂組對蝦在整個實驗過程中健康，且攝食正常又活力良好，無空腸和死亡現(xiàn)象。試驗期間，浸浴組空白對照組對蝦無死亡，但其中有一組出現(xiàn) 1 尾空腸現(xiàn)象。因此 108cfu/mL 濃度以下的浸浴組和投喂組與生理鹽水組無顯著性差異（P㧐0.05）。

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10 葉繼丹;劉襄河;王琨;孔江紅;楊偉;周磊;;花生粕替代魚粉對凡納濱對蝦生長性能、養(yǎng)分消化率和營養(yǎng)狀況的影響[A];中國甲殼動物學會第十一屆年會暨學術研討會論文摘要集[C];2011年

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4 張志懷;高位蝦池水色及其它環(huán)境因子變化對凡納濱對蝦生長的影響[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2005年

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6 于赫男;環(huán)境脅迫對羅氏沼蝦和凡納濱對蝦行為、生長及生理活動的影響[D];暨南大學;2007年

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8 張洋;扇貝、對蝦基因組BAC文庫構建及其重要功能基因的初步篩選和分析[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2008年

9 李二超;鹽度對凡納濱對蝦的生理影響及其營養(yǎng)調節(jié)[D];華東師范大學;2008年

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4 楊運楷;復合益生菌在凡納濱對蝦養(yǎng)殖中的應用及評價[D];上海海洋大學;2019年

5 羅強;凡納濱對蝦工廠化養(yǎng)殖系統(tǒng)中浮游動物群落結構及功能研究[D];上海海洋大學;2019年

6 張龍;凡納濱對蝦中間培育密度及循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)研究[D];上海海洋大學;2019年

7 楊澤禹;口服復方中草藥（HD-4）定量化控制對蝦體內有害菌數量的研究[D];上海海洋大學;2019年

8 甄曉然;凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死癥弧菌江蘇株的分子分型及其拮抗菌篩選[D];上海海洋大學;2019年

9 杜殷煒;玉屏風多糖對凡納濱對蝦生長及免疫機能的影響[D];佛山科學技術學院;2017年

10 朱昔恩;國審品種凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）“桂海1號”生態(tài)育苗技術研究[D];西華師范大學;2019年

本文編號：2782601