【摘要】：副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一種革蘭氏陰性,是一種最常見(jiàn)的食源性病致病菌,廣泛分布在海洋環(huán)境中。逐年遞增的食品安全事件表明副溶血性弧菌目前已經(jīng)成為水產(chǎn)品質(zhì)量的最大威脅,所以,研究副溶血性弧菌預(yù)測(cè)模型及其生長(zhǎng)行為對(duì)食源性致病菌株的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以及水產(chǎn)品(蝦)的貨架期具有實(shí)際意義。本研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下:1.脅迫溫度下兩株高致病性副溶血弧菌的生長(zhǎng)差異比較分析。為比較脅迫溫度下高致病性副溶血性弧菌的生長(zhǎng)差異,本研究選用致病性副溶血性弧菌ATCC 33847(tlh+/tdh+/trh-)和F 18(tlh+/tdh+/trh-),測(cè)定其在南美白對(duì)蝦上4~30℃的生長(zhǎng)情況,采用修正一級(jí)模型擬合其生長(zhǎng)曲線,并基于最優(yōu)模型擬合得到的最大比生長(zhǎng)速率(μmax)、延滯期(LT)比較分析兩株菌的生長(zhǎng)特性。結(jié)果表明,20~30℃時(shí),兩株副溶血性弧菌并未呈現(xiàn)出明顯生長(zhǎng)差異,而4~15℃時(shí)的生長(zhǎng)差異較大。修正Gompertz模型為ATCC 33847和F 18在15~30℃的生長(zhǎng)曲線的最優(yōu)模型(R20.99),Baranyi模型為ATCC 33847在4~7℃以及F 18在7℃下最優(yōu)模型(R20.935),而F 18在4℃和10℃的生長(zhǎng)模型有待于進(jìn)一步研究。15~30℃,F 18的μmax大于ATCC 33847,差值約從0.2增至0.8 Log10(cfu/m L)/h,ATCC 33847的LT大于F 18,差值從2.5 h變化到7 h。比較其他同類(lèi)文獻(xiàn)的μmax二級(jí)模型發(fā)現(xiàn)高致病性菌株存在顯著性生長(zhǎng)差異(P0.05),且差值隨著溫度的升高而變大。因此,脅迫溫度下相同致病性副溶血性弧菌的生長(zhǎng)存在較大的異質(zhì)性,而結(jié)合微生物實(shí)際生活環(huán)境,建議考慮建立以混合菌株為研究對(duì)象的預(yù)測(cè)模型,為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。2.致病性與非致病性副溶血性弧菌在南美白對(duì)蝦上混合培養(yǎng)的生長(zhǎng)行為致病性副溶血性弧菌,一個(gè)重要的食源性致病菌,在環(huán)境中與非致病性副溶血性弧菌株共存。然而,目前的副溶血性弧菌預(yù)測(cè)模型的研究通常專(zhuān)注于單一菌株,從不考慮致病性和非致病性細(xì)菌共存的局面。在本研究中,對(duì)四株副溶血性弧菌菌株(F18:tlh+/trh+/tdh-,ATCC17802:tlh+/trh+/tdh-,F36:tlh+/trh-/tdh-,ATCC33847:tlh+/trh-/tdh+)等量混合后,在不同溫度下(4,7,10,15,20,25和30℃)在即食南美白對(duì)蝦中的生長(zhǎng)行為進(jìn)行了研究,細(xì)菌總數(shù)由微生物傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)法得到。結(jié)果表明副溶血性弧菌混合菌株及其四個(gè)單菌株在15℃~30℃時(shí)呈現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài),在4℃~7℃時(shí)呈現(xiàn)死亡狀態(tài)。而在10℃時(shí),副溶血性弧菌混合菌株在初始100h是死亡狀態(tài),之后菌含量迅速增長(zhǎng),但是對(duì)于單一菌株,只有一個(gè)單菌株F18顯示類(lèi)似的生長(zhǎng)趨勢(shì),而其他菌株一直是緩慢增長(zhǎng)狀態(tài)。與單菌株相比,混合菌株具有較高的最大生長(zhǎng)速率和更短的延滯期,即具有更好的生存能力。上述結(jié)果表明,使用副溶血性弧菌菌株混合菌株建立的微生物預(yù)測(cè)模型,可能更加貼切細(xì)菌真實(shí)的生活環(huán)境,而這項(xiàng)研究也將為微生物預(yù)測(cè)模型的研究提供一個(gè)新的思路。3.PMA多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)探究即食蝦中不同基因型副溶血性弧菌在混合培養(yǎng)中的生長(zhǎng)行為本研究成功構(gòu)建了一種PMA多重?zé)晒釶CR方法,同時(shí)定量檢測(cè)不同基因型副溶血性弧菌(F36:tlh+/trh-/tdh-,ATCC33847:tlh+/trh-/tdh+)在即食南美白對(duì)蝦中的生長(zhǎng)行為,并運(yùn)用Baranyi模型擬合10℃時(shí)不同基因性副溶血性弧菌在即食蝦中的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)。結(jié)果表明10℃時(shí)不同基因型副溶血性弧菌混合菌株在即食蝦上呈現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài),ATCC33847的最大比生長(zhǎng)速率(μmax)為3.559±0.666 Log(CFU/m L)/d,F36的是2.999±0.415 Log(CFU/m L)/d;ATCC33847的延滯期(LT)為2.778±0.138d;F36的是2.826±0.146d。這表明混合菌株中致病性菌株在即食蝦上比非致病性菌株生長(zhǎng)能力要好。這一結(jié)果為研究副溶血性弧菌混合菌株的生長(zhǎng)行為提供了有效的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S945.49
【圖文】：

30℃條件下副溶血性弧菌混合菌株及其單菌株在即食values of μmaxof four V. parahemolyticus strains and their shrimp from 15 -30oC.示，副溶血性弧菌混合菌株及其單菌株在 15℃著溫度變化的關(guān)系曲線。所測(cè)溫度對(duì)不同單菌株不同菌株之間的 CV 值不盡相同，但是都超過(guò)條件對(duì)致病性和非致病性副溶血性弧菌的影響 CV 值相比，在 15℃~30℃條件下，混合菌株的 0.2。據(jù)現(xiàn)有的調(diào)查與研究表明，溫度變化對(duì)副V 值具有直接影響，相對(duì)于最佳生長(zhǎng)條件，單菌強(qiáng)的應(yīng)變能力[58,83,107]，這也表明，目前調(diào)查研有可能低估了副溶血性弧菌的風(fēng)險(xiǎn)值，而未來(lái)基確性以及參考價(jià)值更高，至少由于 CV 值得不穩(wěn)有待于進(jìn)一步完善。下的失活行為

Taq DNA 聚合酶 0.2010μM primer 0.5 10μM probe 0.20DNA 模板 1.0 ddH2O 12.5多重 Real-time PCR 的反應(yīng)條件：本研究多重 Real-time PCR 擴(kuò)增條件如圖4-1 所示。在 7500 Fast Real-time PCR system 中進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，并使用 7500Software v2.0.6 軟件分析相關(guān)數(shù)據(jù)，該軟件在 Applied Biosystems 公司的官方網(wǎng)站上下載。圖 4-1 多重 Real-time PCR 的反應(yīng)條件Fig.4-1 The reaction condition used for multiple Real-time PCR2.6 PMA 多重 Real-time PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，采用人工接種的蝦樣。具體的實(shí)驗(yàn)操作如下：解凍

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 徐馬俊坤;混合培養(yǎng)中致病性及非致病性副溶血性弧菌的比例變化研究[D];上海海洋大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2724290