【摘要】：牡蠣皰疹病毒1型(OSHV-1)屬軟體動物皰疹病毒科(Malacoherpesviridae)、牡蠣皰疹病毒屬(Ostreavirus),是一種雙鏈DNA病毒,在世界范圍內(nèi)廣泛流行,一直以來都是制約我國貝類養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要傳染性病原之一。近幾年,牡蠣皰疹病毒病頻頻爆發(fā),導(dǎo)致貝類生長受阻和高死亡率,給我國貝類養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前人們常用的牡蠣皰疹病毒檢測方法就是設(shè)計引物進行PCR擴增,但是最近幾年不同變異株的出現(xiàn),以前的檢測方法存在一定的局限性,本試驗對比NCBI不同變異株的序列,選取C區(qū)保守區(qū)域,使用巢式PCR檢測方法。設(shè)置7個依次十倍遞減的不同的濃度梯度的病毒DNA,檢測其靈敏性,此方法靈敏度比普通PCR高,特異性良好。用巢式PCR檢測方法對山東七個沿海地區(qū)主要養(yǎng)殖經(jīng)濟貝類(毛蚶、魁蚶、扇貝、牡蠣、菲律賓蛤仔、文蛤、貽貝等)及野生經(jīng)濟貝類(扁玉螺、四角蛤、蟶子等)進行檢測,根據(jù)檢測結(jié)果總結(jié)出2017-2018年間山東省主要經(jīng)濟貝類的牡蠣皰疹病毒1型病爆發(fā)的流行病學(xué)規(guī)律,建立OsHV-1的預(yù)警機制。2017年在山東不同地區(qū)共采集了340份樣品,其中陽性樣品39份,陽性總檢出率11.5%,陽性檢出存在地域性,東營地區(qū)檢出率最高,為33.3%;不同種類中,四角蛤的陽性檢出率最高,約為44%。2018年在山東沿海不同地區(qū)共采集了503份樣品,其中陽性樣品79份,陽性總檢出率為15.7%;青島樣本的陽性檢出率最高,達到68%。共檢測了十個不同品種,不同品種的陽性檢出率結(jié)果顯示,扁玉螺陽性檢出率最高,為40%,脈紅螺的陽性檢出率為33.3%,毛蚶的陽性檢出率為26.3%,菲律賓蛤仔的陽性檢出率為23%,扇貝的陽性檢出率為11%,貽貝的陽性檢出率為6.7%,四角蛤的陽性檢出率為6.3%,牡蠣的陽性檢出率為5%,斑紋蛤和蟶子中未發(fā)現(xiàn)陽性樣本。牡蠣皰疹病毒不僅感染雙殼貝類,對一些腹足綱貝類也有很大的感染性,宿主范圍存在擴大的現(xiàn)象;對水質(zhì)進行了pH、氨氮、亞硝酸鹽的檢測,養(yǎng)殖水體的環(huán)境基本正常。對羊口采集的病料進行變異區(qū)C區(qū)(ORF4/5)的測序分析,對比NCBI數(shù)據(jù)庫與不同變異株進行比對,繪制進化樹,得出羊口死亡毛蚶分離株與中國發(fā)現(xiàn)的魁蚶株親緣關(guān)系最近,通過動物感染試驗,臨床癥狀表現(xiàn)為:閉殼肌無力,行動遲緩,對外界刺激反應(yīng)緩慢,攝食量少或者基本不進食,經(jīng)PCR檢測及測序后確診為牡蠣皰疹病毒,確定了毛蚶是一種新的宿主,通過感染試驗證明了該分離株存在水平傳播,且在感染試驗第6天,毛蚶幼貝開始出現(xiàn)死亡,第12天毛蚶幼貝全部死亡;羊口分離株不僅對于毛蚶存在感染性,對菲律賓蛤仔和扇貝也存在感染性,證明了該種病毒的不同物種的致病性。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S944.121
【圖文】：

調(diào)節(jié)為 20℃，1、2、3 號缸注射羊口分離株病毒試驗組注射前先用 MgCl2（20g/L,W/V）進行麻醉完在避光陰涼處放置兩個小時，再放入培養(yǎng)缸中喂，觀測毛蚶的死亡率，并檢測。 粒毛蚶幼貝，水溫 20℃，提前充氧，放入一只攻 粒扇貝幼貝，水溫 20℃，提前充氧，放入一只攻 粒菲律賓蛤仔幼貝，水溫 20℃，提前充氧，放入個平行試驗，觀測結(jié)果。測方法結(jié)果

圖 2 特異性檢測圖Fig. 2 specific detection mapM:DNAMarker, 泳道 1：患病組織 DNA, 泳道 2：牡蠣皰疹病毒泳道 3：副溶血弧菌泳道，4：派琴蟲，泳道 5：陰性對照。增，只有患病組織 DNA 和 OsHV-1 有目的條帶以證明該巢式 PCR 檢測方法有良好的特異性。

【參考文獻】

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本文編號：2719598