【摘要】：免疫系統(tǒng)包括先天免疫和適應(yīng)性免疫。無脊椎動(dòng)物缺乏適應(yīng)性免疫系統(tǒng),并依靠先天免疫來保護(hù)他們免受病原體和微生物的侵染。本文以羅氏沼蝦為研究對(duì)象,對(duì)其模式識(shí)別和免疫相關(guān)信號(hào)途徑進(jìn)行了研究。(1) C型凝集素(CTL)是在脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物的先天免疫中起重要作用的模式識(shí)別蛋白。本課題從羅氏沼蝦中克隆到一條C型凝集素,命名為MrLec。MrLec的cDNA全長為1431 bp,其開放閱讀框?yàn)?041bp,編碼一個(gè)含346個(gè)氨基酸殘基的蛋白。MrLec的信號(hào)肽長為18個(gè)氨基酸,另外含有一個(gè)長為122個(gè)氨基酸的單個(gè)碳水化合物識(shí)別結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育分析表明MrLec與脊椎動(dòng)物為一個(gè)分支,并且與日本囊對(duì)蝦中的CTL3具有57%的相似性。組織表達(dá)分析表明,MrLec在腸中具有較高的表達(dá)水平,在血細(xì)胞,心臟,肝胰腺,鰓和胃中表達(dá)水平較低。在受到副溶血弧菌刺激后,MrLec在鰓和腸中的表達(dá)量上升。在受到白斑綜合征病毒(WSSV)攻擊的24,36和48小時(shí),MrLec在腮中的表達(dá)量均上調(diào)。同時(shí),MrLec在腸道中的表達(dá)量在36和48小時(shí)后也上調(diào)。MrLec重組蛋白可以在鈣離子存在的情況下凝集細(xì)菌并且結(jié)合革蘭氏陽性菌和陰性菌。另外MrLec重組蛋白可以結(jié)合脂多糖和肽聚糖,并且可以在蝦體內(nèi)促進(jìn)機(jī)體對(duì)弧菌的清除作用。這些結(jié)果表明MrLec參與羅氏沼蝦的免疫反應(yīng)。(2) Toll受體作為模式識(shí)別受體在無脊椎動(dòng)物的先天免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。在這項(xiàng)研究中,我們從羅氏沼蝦中發(fā)現(xiàn)了一種Toll受體并將它命名為MrToll。其cDNA全長為4257bp,編碼1367個(gè)氨基酸。它含有17個(gè)LRR結(jié)構(gòu)域,1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和1個(gè)TIR結(jié)構(gòu)域。構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明MrToll與果蠅中的Toll7和其他節(jié)肢動(dòng)物的Toll為一個(gè)分支。在mRNA水平上,MrToll主要分布于羅氏沼蝦的心臟,肝胰腺,腮,胃和腸。在血細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中,MrToll的表達(dá)量較低。在受到白斑病毒刺激后的24至48小時(shí),MrToll在腮中的表達(dá)量逐漸上調(diào)。在羅氏沼蝦的腮組織中,甲殼素(Cru)基因Cru3和Cru7的表達(dá)水平相對(duì)低于Cru2和Cru4。在受到WSSV攻擊期間,對(duì)羅氏沼蝦的鰓組織中的MrToll進(jìn)行RNA干擾后,Cru3和Cru7的表達(dá)受到抑制。同時(shí),抗脂多糖因子(ALF)基因ALF2,ALF3 ALF4和ALF5在鰓組織中的表達(dá)量也受到調(diào)節(jié)。這些研究結(jié)果表明MrToll可能有助于羅氏沼蝦抗病毒免疫防御反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S945.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2690777