【摘要】：本文對(duì)泥鰍幼魚和成魚腸道菌群多樣性進(jìn)行分析,并從中篩選出在體外能產(chǎn)多種酶以及對(duì)常見致病菌有較強(qiáng)拮抗作用的潛在益生菌枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis),并且評(píng)估投喂對(duì)泥鰍幼魚生長(zhǎng)、消化酶和非特異性免疫的影響,以期為益生菌在泥鰍配合飼料中的應(yīng)用提供參考。主要結(jié)果如下:(1)運(yùn)用高通量測(cè)序方法研究健康泥鰍成魚和幼魚腸道菌群組成。試驗(yàn)分為3組,馴化幼魚組(C1)、野生幼魚組(N1)和野生成魚組(N2)。提取腸道基因組DNA,PCR擴(kuò)增16SrRNA基因V3-V4片段,采用Illumina公司的Miseq測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。在門水平上,在泥鰍馴養(yǎng)幼魚(C1)和野生幼魚(N1)中變形菌門占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),分別為整個(gè)菌群的91.3%、94.4%,厚壁菌門為次優(yōu)勢(shì)菌群,分別占8.5%、4.0%;在野生泥鰍成魚(N2)中,變形菌門占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)占79.6%,梭桿菌門為次優(yōu)勢(shì)菌群占18.4%。在屬水平上,馴養(yǎng)組幼魚(C1)腸道菌群有14個(gè)屬,其中氣單胞菌屬和不動(dòng)桿菌屬占整個(gè)腸道菌群的84.4%;野生幼魚(N1)腸道菌群有17個(gè)屬依次其中不動(dòng)桿菌屬和氣單胞菌屬占整個(gè)腸道菌群的90.2%。野生成魚(N2)腸道菌群有24個(gè)屬,其中氣單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬和鯨桿菌屬占整個(gè)腸道菌群的89.3%。(2)將從野生泥鰍幼魚和成魚腸道分離的93株細(xì)菌進(jìn)行體外產(chǎn)酶試驗(yàn)和對(duì)常見水生動(dòng)物病原菌(嗜水氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、副溶血弧菌和腐敗希瓦氏菌)的拮抗試驗(yàn),得到6株能產(chǎn)3種酶(淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶)的菌株和2株有拮抗活性的菌株,再通過溶血性試驗(yàn)篩選出3株無溶血活性的菌株分別為N1-08、N2-08和N2-26菌株。選擇同時(shí)具有拮抗活性和產(chǎn)酶活性的N1-08菌株,進(jìn)行安全性試驗(yàn),將菌懸液(109 cells/mL)通過腹腔注射泥鰍幼魚,每尾200μL。結(jié)果表明,該菌株對(duì)泥鰍幼魚均無致病性。16S rRNA序列分析表明,N1-08菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis,AB735994)相似。(3)以基礎(chǔ)餌料為對(duì)照組(C),在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行為期4周的飼喂試驗(yàn),研究餌料中添加不同濃度(107 cells/g、109 cells/g)的N1-08菌株對(duì)泥鰍幼魚生長(zhǎng)、消化酶、非特異性免疫的影響。結(jié)果顯示,飼料中添加N1-08菌株對(duì)泥鰍幼魚生長(zhǎng)性能的提高不顯著(P0.05)。飼料中添加不同劑量的N1-08菌株后,能不同程度的提高泥鰍幼魚肝胰臟和腸道消化酶活力(胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)和非特異性免疫活力(血清溶菌酶活力和血清超氧化物歧化酶活力)。
【圖文】：

12圖 2-2 不同樣品 OTU 分布 Venn 圖Fig.2-2 Venn diagram of shared OTU analysis for the different s腸道微生物 Alpha 多樣性分析道的菌群豐度和多樣性見表 2-1，3 組樣品覆蓋率均接近概率很低。Ace 和 Chao 指數(shù)可以對(duì)菌群物種豐度進(jìn)行評(píng)最高，，其次 N1 和 C1。樣品 C1 的香濃指數(shù)和辛普森指數(shù)

圖 2-1 不同樣品稀釋曲線Fig.2-1 Rarefaction curves of the different samples于 OTU 分布 Venn 圖(見圖 2-2）可知，三組樣品中其中 C1、N1 兩個(gè)樣本間共同存在 20 個(gè) OTUs；C；N1、N2 兩個(gè)樣本間共存在 24 個(gè) OTUs；三個(gè)樣本共
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S917.4

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本文編號(hào)：2666943